水稻DIRP基因OsALY1的分子遗传学分析和功能研究

来源 :中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ylg2008asp
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细胞周期调控对生物体的正常生长和发育是至关重要的,RB调控通路在细胞周期调控中起到重要作用。DIRP蛋白家族是一类新发现的在RB通路中发挥作用的蛋白质。近年来,在线虫、果蝇和人中对DIRP基因的功能进行了较深入的研究。但在植物中,除了对拟南芥DIRP基因家族有过粗略报道外,还没细致的功能研究的报道。   本论文以水稻(Oryza sativa L.)为材料,对起基因组中的DIRP基因进行的描述,并对其功能进行初步的研究。   我们用BLAST的方法在水稻基因组中找到两个DIRP蛋白编码基因,分别命名为OsALY1和OsALY2,并且用反向遗传学的方法研究了OsALY1的功能。Southern杂交结果表明OsALY1基因在水稻基因组中为单拷贝。通过绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白在烟草根尖细胞中的定位实验,我们证明了OsALY1定位于细胞核。RT-PCR分析OsALY1的表达模式显示其在根、节、穗中的表达较强强,在茎和叶中的表达相对较弱。对OsALY1 promoter-GUS的基因水稻植株的染色分析显示OsALY1主要在节、叶环、根的上部、小穗基部和内外稃顶端表达,在节间、根尖、叶和小于1厘米的幼穗中基本没有表达,另外在正在分化出苗的愈伤组织中,分化部分的愈伤染色后为蓝色,而未分化愈伤不能被染色。综合RT-PCR和GUS染色结果,说明OsALY1可能在分裂相对活跃的组织表达。   我们还通过RNAi的手段在水稻中下调OsALY1的表达,转化后共得到11个株系的OsALY1 RNAi转基因植株,其中三个株系已经收到种子并且得到了T1代转基因植株,阳性植株主要有两种表型:矮杆/半矮杆和高位分蘖.该结果暗示了OsALY1基因在水稻发育中的重要性。   此外,通过对内含子中的序列分析,我们发现在第11内含子中有许多与OsALY1启动子相同的顺式调控元件。将OsALY1 Intron11与GUS融合后转化水稻,结果发现OsALY1 Intron11具有起始转录的活性,而且其调控的GUS表达模式与OsALY1启动子调控的GUS表达模式非常相似。
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