论文部分内容阅读
猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种新的传染性疾病,临床上以母猪发热、厌食、早产、流产、木乃伊胎、死胎、弱仔等繁殖障碍及各种年龄猪的呼吸症状和仔猪的高死亡率为特征。该病最早于1987年报道于美国南部,现已遍及世界各地,给全球养猪业造成巨大的经济损失。 免疫接种是预防和控制该病的主要措施。安全高效疫苗的研制有赖于对PRRSV分子免疫学的深入了解。为此,必须建立一套病毒“标记”（Marker）系统,利用它来对PRRSV分子免疫学和流行病学进行研究,确定PRRSV病毒蛋白的抗原决定簇图谱。单克隆抗体就是这样的标记系统之一。 由于PRRSV与其他繁殖障碍性疾病（如猪瘟、猪细小病毒病、日本乙型脑炎、猪伪狂犬病等）在临床上很相似,又经常与其他细菌性疾病发生共同感染,同时不同猪场感染PRRS后临床上又有很大差异。仅仅根据临床症状及流行病学等特点很难作出准确的诊断,确诊还必须借助实验室诊断。建立一种敏感性高、特异性好、快速的诊断方法,单抗是一个很好的选择。 本研究以GST融合表达的猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白作为免疫原,制备并建立了一株稳定分泌针对猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞1H11C4,其细胞培养上清效价为1:29,小鼠腹水效价为1:100×211。ELISA及Westren-blot结果显示,1H11C4仅与融合表达的GST-GP5蛋白反应,而与KG表达的蛋白GST不反应。间接免疫荧光结果显示1H11C4能与PRRSV反应,表明本研究所获得的单抗是特异性针对PRRSV GP5蛋白。进一步利用表达的重组GP5蛋白缺失体确定该株单抗主要针对GP5蛋白C端67～200 aa.上的表位,并发现该株单抗能够增强PRRSV在MARC-145细胞上的增殖滴度,这为进一步研究PRRSV GP5蛋白的分子生物学和免疫学特性奠定了坚实的基础。 胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneuromoniae,APP）引起的猪传染性胸膜肺炎是一种严重危害养猪业的呼吸道传染病,其急性病例以肺部广泛纤维性出血为特征,慢性以肺部局灶性坏死和胸膜炎为特征,具有高发病率和死亡率。该病呈全球范围分布,给养猪业造成了巨大的经济损失。疫苗被认为是防制此病的最佳选择,以各地分离的菌株制备的灭活苗对当地流行菌株的感染能提供较好的保护力,这种灭活疫苗对于同种血清型的感染可降低死亡率,但不能降低发病率,不能阻止肺部病变和慢性感染,更不能对异型菌提供交叉保护,因此,迫切需要研制新型的疫苗和诊断方法对该病进行防治。