禽传染性支气管炎DNA疫苗脂质体、壳聚糖复合物的制备及免疫效果研究

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本文对禽传染性支气管炎(IB)DNA疫苗脂质体、壳聚糖复合物的制备工艺进行了研究,制备了IB的脂质体/DNA、壳聚糖/DNA及脂质体/(pDNAIL-2+DNA)复合物(pDNAIL-2为鸡白介素-2真核质粒)三种DNA疫苗,免疫7日龄健康雏鸡,以裸IB DNA疫苗为对照,采用流式细胞仪(FACS)和间接ELISA试验分别对宿主外周血T淋巴细胞亚类CD4~+、CD8~+和特异性抗IBV血清IgG的动态变化进行检测,并在免疫后35天以IBV强毒株进行攻毒保护实验。 IB DNA疫苗复合物制备工艺研究试验结果表明,在卵磷脂与胆固醇摩尔比为5:4、1ml乳化水脂质用量40mg、阳性材料SA占卵磷脂的摩尔数为1/5、有机相与无机相体积比为2:1时采用逆向蒸发法制备可得到形态规则、包封率高的脂质体/DNA复合物混悬液,且脂质体与质粒DNA的结合比为20:1;壳聚糖DNA疫苗复合物的制备工艺为:0.4%壳聚糖溶液与质粒DNA以10:1质量比采用复凝集法混合。 以不同免疫佐剂的IB DNA疫苗经肌肉注射(I.M)免疫健康雏鸡,检测免疫鸡外周血中CD4~+、CD8~+T淋巴细胞数及血清中特异性抗IBV血清IgG动态变化。结果表明:CD4~+、CD8~+T淋巴细胞数量,除pDNAIL-2/DNA疫苗组仅略高于对照组外,其他试验组均与DNA疫苗对照组有差异(P<0.01或P<0.05);在诱导特异性IBV血清抗体方面,试验组的IgG水平高于对照组,但仅脂质体/(pDNAIL-2+DNA)疫苗组在10d时与对照组差异显著。各试验组间,脂质体/pDNAIL-2+DNA疫苗组的CD4~+T淋巴细胞数量高于pDNAIL-2/DNA疫苗(P<0.01)和壳聚糖/DNA疫苗组(P<0.05),及脂质体/DNA疫苗组高于pDNAIL-2/DNA疫苗组(P<0.05);脂质体/pDNAIL-2+DNA疫苗诱导的特异性IgG在10d时高于pDNAIL-2/DNA疫苗组(P<0.05),其它情况下组间均无显著差异。攻毒保护试验结果表明,对强毒的抵抗力脂质体/pDNAIL-2+DNA疫苗=脂质体/DNA疫苗>pDNAIL-2/DNA疫苗=壳聚糖/DNA疫苗>裸DNA疫苗,表明佐剂不仅能增强DNA疫苗诱导细胞和体液免疫应答的能力,特别是细胞免疫反应,而且它们所介导的免疫反应对保护宿主抵抗强毒的攻击中,脂质体的作用强于壳聚糖。 以脂质体/DNA和壳聚糖/DNA疫苗经滴鼻或眼途径(I.N)免疫雏鸡后的细胞免疫反应检测结果表明,壳聚糖介导DNA疫苗刺激机体产生的CD4~+T淋巴细胞数在免疫10d后高于脂质体/DNA疫苗组,但二者仅在第15d有显著差异;脂质体/DNA疫苗组的CD8~+T
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