研究背景：　　儿童支气管哮喘是一种慢性变态反应性气道炎症性疾病。现在在许多关于儿童支气管哮喘发病机制的相关研究中，发现哮喘患者体内可能存在Th1/Th2细胞失衡的情况，但这些研究关于哮喘的发生机制的解释，仍不完全，还需要进一步的研究。最近这些年的新的研究发现Th17（T helper cell 17，辅助性T淋巴细胞17）细胞以及它分泌的细胞因子IL-17A（interleukin-17A，白介素17A）对于支气管哮喘具有重要作用。目前哮喘的治疗方法是激素吸入治疗，但吸入激素并不能治愈哮喘，只是控制哮喘。因此广大医务工作者一直不懈努力寻找不仅仅控制哮喘的方法，而是真正治疗哮喘的方法。幸运的是支气管哮喘的SIT（allergen-specific immunotherapy，过敏原免疫疗法）治疗是可以改变过敏性疾病病程的主要方法。目前认为，SIT 哮喘治疗的主要机制可能是诱导外周抗原特异性免疫耐受形成。Th17细胞在哮喘的气道炎症中发挥重要作用， IL-23（interleukin-23，白介素23）在Th17细胞增殖和稳定起着重要作用，有研究证实IL-23/Th17轴在哮喘的发病中起着重要作用。由此我们推测，在SIT治疗免疫应答过程中，DC（dendritic cell，树突状细胞）摄取抗原并提呈信号给T淋巴细胞，导致IL-23/Th17轴变化参与了SIT免疫治疗的过程，而且这一过程与SIT治疗效率相关，由于口服耐受与皮下特异性免疫治疗(Subcutaneous-specific immunotherapy，SCIT)的免疫应答场所、应答细胞及免疫应答过程均可能不同，而 SCIT 是目前临床上应用最广泛，最主要的免疫疗法。为进一步研究SIT的机制，我们建立大剂量OVA(ovalbumin,鸡卵白蛋白)皮下注射建立 SCIT 治疗哮喘模型，通过检测气道高反应性（ airway hyper-responsiveness，AHR）、气道炎症因子及血清IgE水平等情况，证实建立免疫治疗模型成功，并发现在免疫治疗组中，Treg（regulatory T cell，调节性T细胞）细胞比例明显增高，IL-23 表达水平降低，而 Th17 细胞比例明显降低，这为通过调控IL-23/Th17细胞途径的分化来增强SIT治疗效果提供了新的治疗靶点。　　目的：　　探讨OVA特异性免疫治疗对哮喘小鼠IL-23/Th17轴的影响及机制研究。　　方法：　　1.18只雌性BALB/c实验小鼠随机分为每组6只共3组。3组分别为哮喘组、哮喘免疫治疗、正常对照组[41,45]。其中哮喘免疫治疗组在 0、7 天予溶于 100μL 无菌生理盐水的OVA 10μg + Al(OH)32.25mg混合液，予腹腔注射致敏BALB/c小鼠，予大剂量OVA（V级）皮下注射（含1mg OVA+Al(OH)32mg的生理盐水200μL）21～27天持续7天；在35～41天采用1% OVA雾化激发。10% OVA在50天加强激发1次。在0、7天予哮喘组OVA 10μg + Al(OH)32.25mg溶于100μL无菌性生理盐水混合液，采取腹腔注射致敏 BALB/c 小鼠，21～27 天给予等量生理盐水皮下注射，35～41 天予1% OVA雾化激发，50天予10% OVA加强激发1次。空白对照组予等量生理盐水和生理盐水雾化激发、加强激发。所有动物在末次激发后观察活体反应及气道反应性24小时后并于50天处死、解剖，观察相应指标。　　2.末次激发各组小鼠后检测24小时内气道反应性，用无创体积描记法记录气道反应性。　　3.各组小鼠在50天予以处死，然后取得标本，予以HE（Hematoxylin eosin staining，苏木素-伊红染色）染色各组小鼠肺组织，在显微镜下观察各组小鼠肺组织病理改变，各组小鼠的支气管肺泡灌洗液（BALF），细胞沉淀重悬后用细胞计数板记录细胞数。剩余涂片，HE染色，光学显微镜下细胞分类计数。　　4.ELISA（Enzyme-Linked Immune Sorbent Assay，酶联免疫吸附实验）行血清OVA特异性IgE检测；BALF中IL-5、IL-6、IFN-γ、IL-10、IL-23、IL-17A检测[41,45](检测参照试剂盒说明书进行)。　　5.流式细胞技术检测脾脏、肺组织Treg、Th17细胞比例。　　6.q-PCR检测肺组织转录因子。　　结果：　　1.气道反应性结果：哮喘组气道反应性高于免疫治疗组(P＜0.05)。　　2.各组小鼠的BALF细胞计数，正常对照组与哮喘对照组比较，细胞总数及嗜酸性粒细胞计数明显减少，差异有统计学意义(P＜0.05)；免疫治疗组中BALF的细胞总数，嗜酸性粒细胞、及淋巴细胞较哮喘对照组降低，差异有统计学意义(P＜0.05)；中性粒细胞计数较哮喘对照组无差异。各组小鼠肺组织HE染色：哮喘小鼠免疫治疗组较哮喘对照组的炎症反应明显减轻。　　3.ELISA行血清OVA特异性IgE检测；BALF中IL-5、IL-6、IFN-γ、IL-10、IL-23、IL-17A浓度检测：正常对照组与哮喘对照组相比较，BALF中的IL-10浓度升高，而IL-5浓度降低，血清OVA特异性IgE浓度降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；哮喘对照组与哮喘免疫治疗模型组比较：BALF中IL-10浓度降低，而IL-17A 、IL-5、IL-6及血清OVA特异性IgE浓度均升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。INF-γ在哮喘对照组与哮喘免疫治疗模型组差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究发现IL-10 ，IL-17A均有改变，说明Treg、Th17参与SIT免疫机制，IL-6参与了发病机制。　　4.流式细胞仪检测Treg占Th17细胞的百分率，检测结果示哮喘免疫治疗组Treg/Th17细胞百分率明显高于哮喘组（P＜0.05）。　　5.肺组织标本q-PCR检测Foxp3、RORγt表达水平。结果表明，在Th17及Treg细胞关键转录因子水平发现，免疫治疗组肺组织CD4+RORγt+T细胞及CD4+Foxp3+T细胞与哮喘组比较有显着差异（P＜0.05）。　　结论：　　1.本研究证实IL-23、Th17、Treg细胞参与哮喘小鼠SIT免疫机制。　　2.哮喘免疫治疗作用机制可能是通过抑制IL-23/Th17细胞途径而发挥作用，可望通过调控IL-23/Th17细胞途径的分化来增强SIT治疗效果提供了新的治疗靶点。