EMP-1基因在喉癌中的表达及对其增殖、凋亡、侵袭的影响研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:niehaibin
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前言:  喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)是仅次于肺癌的呼吸道第2高发癌,也是颈部最常见的恶性肿瘤,约占全身恶性肿瘤的1.0%~8.4%,喉癌早期治疗效果好,喉功能可保留,且5年生存率可达90%。流行病学调查表明喉癌在我国东北地区高发,其发病率呈逐年上升的趋势,且喉癌的发生与吸烟、饮酒、寒冷刺激等环境因素有关。分子生物学研究表明,喉癌的发生、发展与Ha-ras、Ki-ras、c-myc、EGF受体基因和C-ebr-2基因的扩增和过度表达密切相关,以及与抑癌基因P53、nm23-HI、P16和Rb的失活有关。  其中上皮细胞膜蛋白-1基因简称EMP-1(epithelial membrane protein-1)基因是在1995年由瑞士学者Taylor等从胎鼠肠cDNA文库中克隆出并命名的,又叫:progression associated protein(PAP)、CL-20、TMP、B4B和PMP22外周鞘磷脂蛋白,同属一个跨膜家族。根据氨基酸结构推测其定位在细胞膜上。在鳞状上皮中富含该基因的mRNA。另有实验发现该基因在支管鳞状上皮细胞中大量表达。与此同时,一些相关研究也证实了EMP-1在胃癌、乳腺癌及子宫平滑肌瘤、脑胶质瘤中均有不同程度的高表达,但也有学者发现在食管癌、喉癌、口腔鳞癌中、前列腺癌及鼻咽癌中EMP-1基因的表达明显低于正常组织。近来发现EMP-1在头颈癌中为下调基因。  EMP-1基因的分子生物学初步研究结果显示,EMP-1基因与肿瘤的发生与发展关系密切,特别是EMP-1基因可阻止肿瘤进一步扩增,该基因表达与细胞的浸润和转移特性有关,EMP-1基因可能是参与细胞信号传导、细胞通信及黏附调节的调节因子之一,并且表面线粒体凋亡途径参与了EMP-1诱导的细胞凋亡。然而EMP-1在喉癌中的发生、发展以及侵袭、转移中的功能作用、及相关机制的研究尚处于空白阶段,进一步研究EMP-1基因的相关功能及机制有可能为喉癌的分子诊断和基因治疗提供新的理论依据和新的策略,这对于处于空白的喉癌分子学研究有着重大的现实和临床意义。  材料与方法:  共取51例喉癌标本和其癌旁组织。通过免疫组化、Western Blot、Quantitativereal-time RT-PCR从蛋白水平及mRNA水平检测不同组标本EMP-1的表达,并分析与各临床因素之间的相关性。构建EMP-1过表达载体,转染喉癌Hep2细胞系,通过MTT法检测细胞的增殖变化、流式细胞法检测细胞的凋亡变化、Transwell法检测细胞的侵袭、转移变化情况,明确EMP-1过表达后对喉癌细胞产生的生物学效应。  实验结果:  1、EMP-1在喉癌组织和细胞中的表达  免疫组化、Western Blot、RT-PCR结果显示,EMP-1在喉癌组织中的蛋白、mRNA的表达明显低于癌旁对照组织和良性肿瘤。  2、EMP-1对喉癌组织和细胞的部分生物学功能  EMP-1的过表达能抑制喉癌细胞的生长、促进喉癌细胞的凋亡、抑制喉癌细胞的侵袭能力,提示其发挥肿瘤抑制基因功能。  结论:  EMP-1参与喉癌的发生发展,它在喉癌中的低表达促进了喉癌细胞的增殖、侵袭,抑制了喉癌细胞的凋亡。
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