【摘 要】
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该文以RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,反转录-聚合酶链式反应)技术为基础,获得了660bp的膜结合型干细胞因子cDNA重组表达质粒.首先从中国汉族妇女
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该文以RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,反转录-聚合酶链式反应)技术为基础,获得了660bp的膜结合型干细胞因子cDNA重组表达质粒.首先从中国汉族妇女早期妊娠的正常蜕膜和绒毛膜临床组织标本中提取总RNA,以寡聚dT为引物,直接反转录总mRNA,获得了早期胎盘组织的总cDNA.再利用合成的SCF特异性引物通过PCR反应从其中扩增得到660bp的干细胞因子cDNA.通过设计在特异性引物5'端的限制性内切酶位点,将片段定向克隆入pGEM-4z质粒中,成功构建了含有膜结合型SCF cDNA的新质粒pGSM.Sanger双脱氧法测定质粒的序列后,证实是外显子6缺失的膜结合型SCF的重组表达质粒,IPTG诱导表达产物的分子量与预期基本一致.测序结果中,发现编码第166位丙氨酸和第203位谷氨酸的密码子第三位碱基改变,但编码的氨基酸未变.造成该现象的原因尚待进一步确定.
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