急性重症胰腺炎血管内皮损伤机制及保护研究

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目的:通过体内实验,从分子及整体两个层面探讨急性重症胰腺炎(SAP)时血管内皮细胞损伤所致多器官功能障碍综合征(MODS)的发生机制及白蛋白对血管内皮细胞胰蛋白酶损伤的保护作用,为临床治疗SAP提供实验依据。方法:270只健康成年雄性SD大鼠随机分为6组,每组45只。分组如下:A组对照组即假手术组:开腹后仅轻轻翻动十二指肠和胰腺,关腹;B组SAP模型组:以5%的牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射诱导SAP模型;C组奥曲肽组:SAP组+奥曲肽;D组乌司他丁组:SAP组+奥曲肽+乌司他丁;E组白蛋白组:SAP组+奥曲肽+白蛋白;F组混合组:SAP组+奥曲肽+乌司他丁+白蛋白。以上各组按时间点再随机分为三组,分别为3h组、6h组、12h组,每组15只,各治疗组动物均于造模后30分钟皮下注射奥曲肽25μg/kg。在此基础上,D组给予乌司他丁1万U/kg;E组给予5%白蛋白10ml/kg;F组给予乌司他丁1万U/kg+5%白蛋白10ml/kg;均经大鼠阴茎背静脉注射。每组按不同时间点随机股静脉取血处死大鼠,并收集胰腺、肝、肾、肺等脏器组织标本。测定各组血清AMY、 ALB、 ALT、 BUN、 Cr等指标;并对以上各脏器组织行病理形态学检查,参照Schmidt评分标准对SAP组大鼠各时间点胰腺组织进行评分。流式细胞仪技术计数血循环中脱落的血管内皮细胞(CEC)。采用免疫组化染色测定血管内皮细胞紧密连接occludin蛋白的表达。结果:1.5%牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射成功诱导了SAP并发MODS大鼠模型。2.各组大鼠血清AMY、 ALT、 BUN、 Cr、CEC计数在造模成功后3h明显升高,呈逐渐上升的趋势,12h达到高峰,而ALB及内皮细胞紧密连接occludin蛋白的表达随时间延长逐渐降低。在相同时间点内,SAP组大鼠各指标的损伤程度最重,治疗组中以奥曲肽、乌司他丁与白蛋白混合治疗组大鼠的损伤程度最轻。假手术组大鼠各时间点检测结果正常。结论:1.SAP时大量胰酶被激活释放入血,使血管内皮细胞紧密连接蛋白表达下降,导致血管内皮细胞脱落,血管内皮屏障的完整性及通透性遭到破坏继而导致远隔脏器的损伤。2.白蛋白可以保护血管内皮细胞间紧密连接蛋白,避免胰蛋白酶的破坏,并与乌司他丁有协同作用,维持了血管内皮屏障的完整性和通透性;可能会降低SAP时并发MODS的发生率,达到保护远隔脏器的作用。
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