人乳头状瘤病毒(HPV)是一种非包膜双链DNA病毒,是宫颈癌等多种癌症诱发的主要原因。HPV16、18、58是感染70%宫颈癌的HPV基因型,以上三型的HPV疫苗生产,将对预防我国及东南亚地区宫颈癌的发生具有重要的现实意义。本研究对表达目的蛋白的菌株进行筛选,并对菌种质量进行全面检定,取得了以下结果。(1)将表达可溶性HPV L1蛋白的重组质粒转入四种宿主菌 BL21(DE3)、BL21、Origami2(DE3)和 XA90,经过单克隆初筛、复筛和检测分析,XA90菌株在16型、18型和58型蛋白表达量方面,均高于其它三种菌。(2)优化确定了 XA90菌株的摇瓶培养条件:诱导温度30℃、诱导时间6h、诱导剂(乳糖)浓度2g·L-1。(3)通过摇瓶培养制备原始种子批菌液,继代培养制备主种子和工作种子批,并参照《中华人民共和国药典》,制定种子批菌种的检定项目及质量标准,对HPV16、18和58型疫苗种子批菌种质量进行了全面检定,结果表明各项质量控制指标均符合标准。(4)通过连续传代培养,检测菌株中质粒稳定性、目的蛋白及基因的表达,确定菌种的种子批传代25代仍保持遗传稳定性和疫苗的有效性。本课题研究为实现HPV三价疫苗的规模化生产奠定了坚实的基础。