目的：　　制备偶联甲/乙型流感病毒单克隆抗体的免疫磁珠，利用免疫磁珠可以分离、富集、浓缩病原微生物的特征，并结合免疫层析技术，建立甲/乙型流感病毒的免疫磁珠富集与免疫层析一体化检测方法。　　方法：　　1.通过胶体金标记和免疫层析技术，采用双抗体夹心法，初步建立快速检测甲/乙型流感病毒的胶体金免疫层析方法，评价其灵敏度和特异性。　　2.以纳米磁珠代替胶体金作为标记物的信号指示载体，采用双抗体夹心检测方法，以EDC/NHS法制备偶联了甲/乙型流感病毒抗体的免疫磁珠。　　3.优化免疫层析检测系统，确定检测线和质控线的抗体最佳包被浓度和优化缓冲液的表面活性剂。利用免疫磁珠结合免疫层析技术，初步建立磁珠免疫层析直接检测方法，评价其灵敏度。　　4.利用免疫磁珠将目标抗原浓缩及富集分离的特性，优化检测条件，建立快速检测甲/乙型流感病毒的免疫磁珠富集与免疫层析一体化检测方法。　　5.将梯度稀释的甲/乙型病毒液，进行荧光定量PCR(Real-Time PCR)检测，检测的CT值越低，病毒的起始浓度越高。根据荧光定量PCR检测来评价磁珠免疫层析法、免疫磁珠富集与免疫层析一体化检测法以及胶体金免疫层析法的灵敏度。　　6.采用荧光定量PCR方法检测甲/乙型流感作为标准，免疫磁珠富集与免疫层析一体化检测法检测80份临床咽拭子样本，同时与用传统的胶体金检测法进行比较，评估磁珠富集检测与免疫层析一体化检测方法的灵敏度、特异性及阳性符合率，并进行方法学评价。　　结果：　　1.初步建立了甲/乙型流感病毒检测的胶体金免疫层析法，其灵敏度较高，特异性较好。　　2.优化免疫层析系统，甲型流感病毒胶体金检测试纸条检测线抗体包被浓度为2mg/mL，质控线抗体浓度为300ng/mL;乙型流感病毒胶体金检测试纸条检测线抗体包被浓度为4mg/mL，质控线抗体浓度为300ng/mL，检测效果最佳。纳米磁珠免疫层析直接检测方法可以检出稀释度为10-2的（相应的荧光定量PCR检测Ct值为20）甲型H1N1流感病毒，可以检出稀释度为10-1的乙型流感病毒（相应的荧光定量PCR检测Ct值为23）。　　3.通过磁珠将样本富集、浓缩、分离后，建立的免疫磁珠富集与免疫层析一体化检测法可以检出甲型H1N1流感病毒稀释度为10-3，乙型流感病毒稀释度为10-2，说明本法与纳米磁珠免疫层析直接检测方法相比，灵敏度得到了明显提高，并且检测其他呼吸道病毒为阴性，说明特异性好。　　4.纳米磁珠免疫层析直接检测方法与胶体金免疫层析检测方法在特异性、灵敏度上大致相同，均可以检出荧光定量PCR检测甲型H1N1流感病毒的Ct值≤22的咽拭子样本，检测乙型流感病毒的Ct值≤23的咽拭子样本;但是免疫磁珠富集与免疫层析一体化检测法可以检出荧光定量PCR检测甲型H1N1流感病毒Ct值≤28的咽拭子样本，可以检出乙型流感病毒的Ct值≤29的咽拭子样本，说明免疫磁珠富集与免疫层析一体化检测法的检测灵敏度比上述两种方法提高了一到两个数量级。　　5.免疫磁珠富集与免疫层析一体化检测法检测临床咽拭子样本，以荧光定量PCR检测方法作为标准，其阴性符合率（特异性）为100％，阳性符合率为70.8％，而胶体金法检测阴性符合率（特异性）为100％，阳性符合率为47.9％，并且磁珠免疫层析法与胶体金法之间差别有统计学意义(P＜0.05)。　　结论：　　采用EDC/NHS方法制备了偶联甲/乙型流感病毒单克隆抗体的免疫磁珠，探索研究了检测甲/乙型流感病毒抗原的纳米磁珠免疫层析直接检测方法。利用磁珠的分离、富集特性，建立了免疫磁珠富集与免疫层析一体化检测方法，可以顺利完成免疫层析检测，特异性更好、灵敏度更高，并且超过现有的胶体金法检测水平，适用于临床现场快速检测甲/乙型流感病毒。