藏药榜间资源学与大花龙胆质量标准研究

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藏药榜间-即龙胆花,来源于龙胆科(Gentianaceae)龙胆属(Gentiana)多种植物的花和花枝,是常用大宗藏药材,存在诸如基原复杂、品种混乱、资源短缺、质量标准不完善等问题。本研究在前期榜间嘎保(白花龙胆)品种整理的基础上,进一步对蓝、黑、杂花类榜间进行品种考证,厘清传统分类的依据及现实意义,阐明其主流药材品种及使用现状。在此基础上,对川西高原榜间资源进行田野调查,开展主流品种大花龙胆、高山龙胆(岷县龙胆)、华丽龙胆、蓝玉簪龙胆的群落生态学研究,采用MaxEnt生态位模型联合Arc GIS平台进行生态因子建模,分析榜间主流品种的生长适宜性产地特征;采用HPLC指纹图谱对主流品种进行成分比较,基于化学计量学与“化学型”分类辨析,探讨传统分类的合理性;同时,鉴于大花龙胆成分的特殊“化学型”,采用PHPLC和各种谱学技术对大花龙胆乙醇提取物正丁醇部位的成分进行分离纯化和结构鉴定;对大花龙胆中的大花龙胆苷A进行TLC鉴别和HPLC含量测定。实验结果如下:(1)对现代文献所记载的榜间中蓝、黑、杂花类基原进行整理和归并,确定文献记载其来源共有14个种、3个变种;藏医院、藏药企业和市场走访调查发现,其主流品种来源于多枝组华丽系龙胆,以蓝玉簪龙胆G.veitchiorum为主,以同组同系的华丽龙胆G.sino-omata、线叶龙胆G.lawrencei var.farreri为辅。(2)在四川省甘孜州康定市、雅江县、巴塘县、稻城县海拔4200 m以上的高山草甸和高山灌丛建立了6个样地共23个样方。所调查样地具有的榜间类植物有大花龙胆G.szechenyii、高山龙胆G.algida、蓝玉簪龙胆G.veitchiorum。各样地土壤质地为粘壤土、砂质壤土,呈酸性,且土壤肥力较高。大花龙胆、岷县龙胆(高山龙胆)的最适分布区部分相似,但后者成片状分布,且在新疆地区有适宜分布区。华丽龙胆和蓝玉簪龙胆原植物最适分布区域相似,但后者分布区面积大于前者。各原植物的分布主要受海拔、降水量、最冷月最低温和植被类型影响。(3)建立了榜间主流品种的指纹图谱研究方法,方法学验证表明该方法精密度、准确度较高,稳定性良好。样品相似度评价、系统聚类分析、主成分分析结果表明,大花龙胆和其他品种能较好地分开;而大部分高山龙胆、岷县龙胆、蓝花类龙胆距离较近,且不同品种的蓝花类龙胆距离也较近。将榜间主流品种分为2型:其中I型以大花龙胆为代表,獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷等单环烯醚萜类等成分缺失或含量较低,具有乌奴龙胆苷D、平龙胆酯苷、大花龙胆酯苷A、大花龙胆苷A等含有苯甲酰基片段的环烯醚萜类成分;II型主要为高山、岷县、蓝花类龙胆,均不含苯甲酰基片段的环烯醚萜类成分,但存在獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷等单环烯醚萜类成分,其周围化学成分较多。异荭草苷、异金雀花素-2″-O-吡喃葡萄糖苷、异金雀花素等黄酮类成分在2种化学型中均存在,且在II型中含量普遍较高。(4)从藏药大花龙胆乙醇提取物的正丁醇部位分离得到6个化合物,分别鉴定为异金雀花素-2″-O-吡喃葡萄糖苷(1)、异金雀花素(2)、乌奴龙胆苷D(3)、平龙胆酯苷(4)、大花龙胆酯苷A(5)和大花龙胆苷A(6),大花龙胆酯苷A为新的环烯醚萜类化合物。(5)首次建立了大花龙胆中大花龙胆苷A的TLC鉴别方法,17批大花龙胆薄层鉴别结果表明,该方法对大花龙胆苷A具有较好的专属性;首次建立了大花龙胆中大花龙胆苷A的HPLC测定方法,该方法简便、准确,精密度、重复性良好,17批大花龙胆含量测定结果表明,大花龙胆苷A的含量与药材采收期密切相关,且随储存时间增加而降低。结合前期工作基础,拟定了大花龙胆质量标准草案。
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