原发性肝癌细胞Coronin-1C基因后干扰Rac1基因激活及损伤肿瘤形成潜能的研究

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目的:研究Coronin-1C在HCC中的作用及其可能机制进行了探讨,以期为临床CCRCC的有效治疗提供新的有效靶位点。方法:采用免疫组织化学染色和蛋白质免疫印迹的方法检测了Coronin1C在HCC中的表达情况;采用MTT分析,伤口愈合实验,小室侵袭实验检测了Coronin1C对HCC细胞增殖,迁移及侵袭能力的影响。裸鼠体外成瘤实验检测了Coronin1C对HCC成瘤能力的影响。采用免疫荧光染色和鬼笔环肽标记的方法检测了Coronin1C对HCC细胞的极性和肌动蛋白网络的影响。GST-pull down实验结合蛋白质免疫印迹检测了Coronin1C对Rac-1活化的影响。结果:Coronin1C mRNA和Coronin1C蛋白在HCC组织中的表达普遍上调;在细胞创伤愈合实验中,Coronin1C过表达使伤口愈合速度变快,而Coronin1C敲除抑引起伤口愈合速度减缓;MTT分析中,Coronin1C的敲除引起细胞增殖抑制;小室侵袭实验中,Coronin1C敲除后穿过基膜的细胞数量明显减少;裸小鼠成瘤实验中,Coronin1A敲除的细胞体内致瘤能力下降;免疫荧光染色和鬼笔环肽标记发现Coronin1A敲除的稳定转染细胞中,应力纤维的含量明显下降,高尔基器的重排减少,同时细胞片状伪足的数量也明显减少;GST-pull down实验发现Coronin1C敲除后细胞中与GST-PKA-CD结合的Rac1的量减少。结论:在HCC组织中Coronin1C的表达普遍增高,在HCC细胞中抑制Coronin1C的表达引起细胞的增殖,迁移以及侵袭能力下降,进一步的研究发现Coronin1C的表达是通过调节肌动蛋白骨架的装配,减少细胞的极性,激活Rac1促进肿瘤细胞的生长增殖。
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