不同剂型的垂盆草治疗急性肝损伤大鼠的实验研究

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目的:以四氯化碳(CCL4)橄榄油溶液腹腔注射制造的大鼠急性肝损伤模型为研究对象,分别予不同剂型的垂盆草溶液灌胃治疗,观察造模后大鼠血清和组织学的变化,探讨不同剂型的垂盆草治疗急性肝损伤大鼠的疗效和部分作用机理,为不同剂型的垂盆草治疗急性肝损伤的临床用药选择提供实验依据。  方法:  1.雄性Wistar大鼠,随机分成六组:正常对照组、模型对照组、鲜垂盆草煎煮组、干垂盆草煎煮组、垂盆草颗粒组、垂盆草配方颗粒组。实验第1天,各实验组大鼠腹腔注射(ip)纯CCL41 ml/kg;第4天和第7天,各实验组大鼠ip30%CCL4(用橄榄油配成30%的溶液)1 ml/kg诱导急性肝损伤模型;正常对照组大鼠ip化学纯橄榄油1 ml/kg。中药灌胃治疗,7d后取材。  2.观察造模后大鼠的一般情况,于腹主动脉无菌采血,检测肝功能(TBil、ALT、AST、AKP);取大鼠肝组织,分别通过光学显微镜HE染色观察结构变化,透射电子显微镜观察肝组织的超微结构。  3.取大鼠肝组织,检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、细胞色素P4502E1(CYP2E1)、MicroRNA-122、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、一氧化氮(NO)。  结果:  1.不同剂型的垂盆草均能显著改善急性肝损伤大鼠的肝功能和病理损伤,尤以鲜垂盆草的作用更为显著。①肝功能:同模型对照组比较,鲜垂盆草煎煮组、干垂盆草煎煮组、垂盆草颗粒组和垂盆草配方颗粒组均可降低大鼠血清Tbil、ALT、AST、AKP水平,p<0.05,或p<0.01;同鲜垂盆草组比较,ALT、AST中干垂盆草煎煮组、垂盆草颗粒组和垂盆草配方颗粒组呈显著性差异,p<0.05,Tbil中垂盆草颗粒组呈显著性差异,p<0.05。②光镜下,HE染色显示,正常对照组:肝组织结构正常。模型组:肝组织结构被严重破坏,肝静脉明显淤血,汇管区炎细胞浸润,中央静脉周围细胞发生明显的水肿变性,细胞间隙增宽,细胞体积增大,细胞内可见明显的脂肪变性和气球样变。鲜垂盆草煎煮组、干垂盆草煎煮组、垂盆草颗粒组和垂盆草配方颗粒组:四治疗组均可见肝索结构破坏减轻,肝静脉淤血减少,中央静脉周围细胞的水肿变性明显减轻,肝组织内炎细胞浸润减轻。③电镜下,正常对照组:肝细胞核呈圆形或卵圆形,核膜清晰连续,胞浆内粗面内质网发达,滑面内质网较少,线粒体含量丰富,形态正常,内嵴清晰,胞浆内无明显脂滴分布。模型组:肝细胞内可见大量大小不等的脂滴分布在核周围,线粒体扩张变形,体积增大,外形不规则,呈球形、长型或不规则形,线粒体嵴紊乱减少,严重者出现崩解;滑面内质网增多,粗面内质网脱颗粒,数量减少;可见肝细胞核膜不连续,挤压变形。各垂盆草治疗组:肝细胞内脂滴有不同程度的减少,线粒体形态和核膜趋于正常,以鲜垂盆草治疗组更为显著。  2.不同剂型的垂盆草均能显著改善急性肝损伤大鼠的脂质过氧化和炎性相关指标,其中以鲜垂盆草的作用更为显著。①MDA、SOD和GSH-Px:同模型对照组比较,鲜垂盆草煎煮组、干垂盆草煎煮组、垂盆草颗粒组和垂盆草配方颗粒组均可降低大鼠肝组织MDA水平,p<0.05,或 p<0.01。鲜垂盆草煎煮组可提高大鼠肝组织SOD水平,p<0.05。鲜垂盆草煎煮组和垂盆草颗粒组可提高大鼠肝组织GSH-Px活力,p<0.05。同鲜垂盆草组比较:MDA中干垂盆草煎煮组、垂盆草颗粒组和垂盆草配方颗粒组呈显著性差异,p<0.05。②CYP2E1:正常对照组、鲜垂盆草煎煮组、垂盆草颗粒组和垂盆草配方颗粒组的CYP2E1蛋白水平均低于模型对照组,p<0.05或p<0.01。③miR-122:鲜垂盆草煎煮组和垂盆草配方颗粒组的miR-122高于模型对照组,p<0.05。④TNF-α、IL-6和NO:同模型对照组比较,鲜垂盆草煎煮组、干垂盆草煎煮组、垂盆草颗粒组和垂盆草配方颗粒组均可降低大鼠肝组织TNF-α、IL-6、NO水平,p<0.05,或p<0.01。同鲜垂盆草组比较:TNF-α中干垂盆草煎煮组呈显著性差异,p<0.05; IL-6、NO中干垂盆草煎煮组、垂盆草颗粒组和垂盆草配方颗粒组呈显著性差异,p<0.05或p<0.01。  结论:  1.不同剂型的垂盆草均显著改善急性肝损伤大鼠的肝脏量化指标和病理损伤,对急性肝损伤大鼠具有治疗作用,其中鲜垂盆草煎煮液灌胃治疗的疗效最为显著。  2.不同剂型的垂盆草均可治疗急性肝损伤大鼠,可能是通过抗脂质过氧化和抗炎发挥作用。
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