论文部分内容阅读
经典Wnt/β-catenin/TCF信号通路是参与调控细胞增殖、分化、凋亡及机体免疫等多种生理病理过程的主要信号通路之一。关于β-catenin/Lef1与p53之间的关系，已有实验证明p53在多种肿瘤系细胞中可以下调Wnt/β-catenin信号通路。而Wnt/β-catenin信号通路对p53是否存在调控作用及其可能机制，目前尚未有任何数据。 针对此问题，本实验在AGS细胞中过表达β-catenin/Lef1，结果显示可上调p53蛋白质表达量，揭示β-catenin/Lef1与p53之间存在调控环路，即β-catenin/Lef1上调p53，进而p53负调控β-catenin/Lef1;二者存在负反馈环路。为进一步验证Wnt/β-catenin/Lef1能否直接调控p53基因转录，本论文通过利用荧光素酶报告基因法验证β-catenin/Lef1与p53上游顺式作用元件能否直接结合启动p53基因转录。Western Blot及荧光定量PCR方法在蛋白水平和分子水平验证Wnt/β-catenin/Lef1不能直接调控p53基因转录，即β-catenin/Lef1与p53上游顺式作用元件不存在蛋白与DNA相互作用。实验提示β-catenin/Lef1并非直接调控p53转录，可能是在蛋白质水平通过其他蛋白因子作用产生关联。上述研究结果为后续研究提供实验基础。