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目的:近几年来,慢性肾病的发病率正在急速上升,严重危害了人类身体健康。肾纤维化是肾脏在各种致病因子如炎症、损伤等作用下的病理修复反应,是慢性肾脏病共同的病理转归,是决定肾病发展和预后的重要因素。所以,治疗肾纤维化是治疗肾病相关疾病的关键。东直门医院院长王耀献教授,根据长期临床经验总结得到方子“肾康方”。为进一步探索其作用机制,拆方为以下四个方子。方1为软坚散结组方,包含海藻、牡蛎、鳖甲3味中药,方2为活血化疲组方,包含丹参、红花、川芎3味药,方3为软坚散结+活血化瘀组方,以及方4消癥散结组方,由海藻、牡蛎、鳖甲、黄芪、当归、三七6味药组成。对于“肾康方”本课题组东直门医院动物药理实验研究发现,4个拆方组均可以明显减少肾纤维化大鼠尿蛋白含量,调节其血肌酐及尿素氮水平,具有改善肾纤维化大鼠肾功能的作用,但是为进一步研究其药效物质基础,本课题将运用血清药理学方法对这4个方子进一步研究其药效成分。方法:1.活血化瘀与软坚散结化学物质组学研究以方3水提液作为研究对象,以0.1%乙酸水溶液-乙腈作为流动相,选择300 nm为检测波长,梯度洗脱,得到组3复方液相图谱。在组3液相图谱分析条件之上,采用HPLC-MS/MS分析技术,对复方中的化学成分进行定性分析。2.临床常用组方化学物质组学研究以组4水提液为研究对象,以0.1%乙酸水溶液-甲醇作为流动相,选择254 nm为检测波长,梯度洗脱,得到组4复方液相图谱。在得到组4液相图谱分析条件之上,采用HPLC-MS/MS分析技术,对复方中的化学成分进行定性分析。3.组3的血清药物化学研究以大鼠血清为研究对象,采用HPLC-MS/MS液质联用分析技术,建立大鼠血清液质图谱,与之前水提液液质图谱做对比,找出有效物质基础。4.组4的血清药物化学研究以大鼠血清为研究对象,采用HPLC-MS/MS液质联用分析技术,建立大鼠血清液质图谱,与之前水提液液质图谱做对比,找出有效物质基础。结果:1.建立了抗肾纤维化系列组方-组3(活血+软坚)的液相图谱。2.建立了抗肾纤维化系列组方-组4(消癥散结)的液相图谱。3.定性分析了抗肾纤维化系列组方-组3的21种化学成分,其中有6种化合物来源于丹参,12种来源于红花,5种来源于川芎,其中川芎和红花有3种共有成分。找出了血清中可能起作用3种化学成分,为临床上研究奠定了物质基础。4.定性分析了抗肾纤维化系列组方-组4的16中化学成分,其中有13种化合物来源于黄芪,3种化学成分来源于当归。找出了血清中可能起作用的4中化学成分,为后边的研究奠定基础。结论:在灌胃方3后,在大鼠的血清里发现化合物Y1、Y2、Y3、,其中Y1为香草酸(Vanilla acide);Y2为丹酚酸 B(SalvianolicacidB);Y3为洋川芎内酯 H(SenkyunolideH)。在灌胃方4后,在大鼠的血清里发现化合物M1、M2、M3、M4,其中M1为川芎内酯(Senkyunolide);M2为丁基苯酞(Butylphalide);M3为Succinoadenosine;M4为Formononetin 7-O-β-D-glucoside-6"-O-malonate。