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目的探讨体外培养原发性开角型青光眼(POAG)小梁网细胞的培养方法及其生物学特性,并在此基础上研究原发性开角型青光眼小梁网细胞是否表达表皮生长因子(EGF)及其受体(EGFR),EGF对POAG小梁网细胞增殖和凋亡的影响及EGF对小梁网细胞表达EGFR的影响。方法采用组织块培养法进行POAG小梁网细胞的体外培养,用倒置显微镜、透射电镜、免疫细胞化学法染色等方法观察体外培养的POAG小梁网细胞生物学特性并进行细胞鉴定。采用ELISA法检测体外培养的POAG小梁网细胞是否表达EGF及EGFR;采用CCK-8法和流式细胞术检测体外培养的第5代小梁网细胞经EGF终浓度分别为0ng/ml(对照组),5ng/ml,10ng/ml,20ng/ml,50ng/ml和100ng/ml的DMEM/F12处理48小时后小梁网细胞的增殖率和凋亡率;ELISA法检测小梁网细胞经EGF终浓度为0ng/ml,50ng/ml的DMEM/F12处理48小时后小梁网细胞EGFR的表达。结果1.组织块培养10天左右可见细胞从其边缘向外生长,透射电镜、免疫细胞化学染色证明其为POAG小梁网细胞。2.ELISA检测结果显示小梁网细胞表达EGF和EGFR,其ELISA检测的吸光度值(OD值)分别为0.13、0.33,计算出POAG小梁网细胞培养上清液中EGF及EGFR的表达量分别为1.25ng/ml、0.89ng/ml。3.运用CCK-8法对经EGF终浓度为0g/ml,5ng/ml,10ng/ml,20ng/ml,50ng/ml,100ng/ml的DMEM/F12处理的实验组细胞进行检测,其吸光度值(OD)分别为(0.75±0.05),(0.80±0.07),(0.84±0.05),(0.89±0.02),(0.77±0.04),与对照组(0.66±0.05)相比,差异有统计学意义(P<0.05)。4.运用流式细胞仪对经EGF终浓度为0 ng/ml(对照组),5ng/ml,10ng/ml,20ng/ml,50ng/ml,100ng/ml的DMEM/F12处理48h的细胞进行检测,小梁网细胞的凋亡率分别为(16.14±0.44)%,(14.22±0.18)%,(10.90±0.49)%,(5.98±0.14)%,(5.58±0.21)%,(9.93±0.17)%,各浓度组与阴性对照组比较,凋亡率下降具有统计学意义(P<0.05)。5.经EGF终浓度为50ng/m的DMEM/F12处理的细胞EGFR的表达量的OD值为(0.20±0.01),与阴性对照组的OD值(0.17±0.01)相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论l.掌握POAG小梁网细胞的体外细胞培养技术及其生长特点、超微结构,能够成功地进行POAG小梁网细胞的体外培养及鉴定。2.体外培养的POAG小梁网细胞上清液中表达EGF及EGFR。3.EGF能促进小梁网细胞的增殖,减缓其凋亡,并在一定的范围内呈现剂量依赖性。4.EGF能够促进小梁网细胞表达EGFR。