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以溶藻弧菌HY9901为模板，参照GenBank上登录的其他溶藻弧菌菌株二氢硫辛酰胺脱氢酶基因及D-酪氨酸-tRNA脱酰基酶基因序列设计引物，克隆了溶藻弧菌HY9901菌株的dldh和dtd基因，并对其进行生物信息学分析。结果表明dldh基因含有一个1428bp的开放阅读框，编码475个氨基酸，预测其相对分子量为50.99kDa，理论等电点为5.51，Blast分析发现溶藻弧菌DLDH与副溶血弧菌同源性高达99%，与哈维氏弧菌高达96%。而dtd基因全长435bp，编码144个氨基酸序列，理论分子量为16.09，理论等电点为4.98，Blast分析发现溶藻弧菌DTD与副溶血弧菌同源性高达95%，与哈维氏弧菌高达96%。将扩增到的dldh与dtd分别亚克隆到pET-32a(+)质粒中，构建pET-DLDH，pET-DTD原核表达质粒，并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。蛋白表达条件优化分析，DLDH在37℃，IPTG浓度0.7mmol/L时诱导4h蛋白表达量最大，重组蛋白主要以包涵体形式存在；DTD在37℃，0.1mmol/L的IPTG浓度下诱导5h时重组蛋白以包涵体形式大量表达。蛋白经纯化分析，并通过Western blot验证，表明表达蛋白正确。利用基因的重叠延伸技术，将dldh及dtd两个基因通过三次PCR技术拼接到一起形成dldh-dtd，并构建原核表达载体，且在大肠杆菌中表达。蛋白表达条件优化分析融合蛋白在37℃、IPTG浓度0.4mmol·L-1诱导4h时蛋白表达量最高，蛋白主要以包涵体形式存在。利用亲和层析技术对融合蛋白进行纯化分析，在咪唑150mmol·L-1条件下达到最佳洗脱效果，将纯化的蛋白进行免疫印迹分析，在NC膜上可见与预测蛋白相符的清晰条带，说明融合蛋白成功表达。将表达的DLDH、DTD以及DLDH-DTD融合蛋白分别免疫斜带石斑鱼，Elisa法检测抗体效价表明，所有免疫鱼均有较高效价，与非免疫对照组差异显著（P<0.01）,各重组蛋白免疫组在第四周时抗体水平达到峰值，而DLDH-DTD最高，其次为DLDH，DTD抗体水平最低。在三种弧菌攻毒试验中，DLDH-DTD在溶藻弧菌攻毒下免疫保护率最高（95%），哈维氏弧菌及副溶血弧菌作用下分别为90%；DLDH在溶藻弧菌攻毒下保护率为90%，哈维氏弧菌及副溶血弧菌攻毒下分别为85%；而DTD免疫组相对较低，保护率分别为60%、55%、50%。由此可以认为重组蛋白可以作为弧菌交叉疫苗候选蛋白。通过插入突变方法，构建dldh基因插入突变株，并研究了缺失株相关的表型变化。结果：dldh基因的突变，明显影响了溶藻弧菌的生长曲线、泳动能力（p＜0.05）及生物膜形成能力（p＜0.05），这为弧菌减毒疫苗鉴定了基础。