论文部分内容阅读
目的:脑水肿是脑梗死后重要的继发性病理生理变化,脑缺血后脑水肿加重与水通道蛋白-4(aquaporin-4,AQP-4)表达呈正相关,近年来研究表明脑缺血后内皮素-1(endothelin-1,ET-1)表达增高是脑水肿形成的主要原因之一。亚低温(Mild hypothermia)能抑制脑组织内AQP-4的表达减轻脑水肿,那么亚低温是否能通过降低ET-1的表达而减轻脑水肿,目前国内研究尚少。本课题通过研究亚低温对局灶性脑缺血大鼠ET-1表达的影响,探讨亚低温脑缺血保护可能的机制。
方法:用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。将健康雄性SD大鼠随机分成三组:假手术组、常温组、亚低温。各组又分为6h、24h、3d、5d四个时间点。假手术组每个时间点9只,常温组和亚低温组每个时间点18只。亚低温组大鼠于模型手术后立即用冰袋降温及白炽灯调整与动物距离加温的方法,保持肛温(32-33)℃3h,然后放于恒温箱(25℃)使其自然复温。大鼠完全清醒后进行神经功能缺失评分(neurological deficitscore,NDS),1≤NDS≤3的大鼠选入组。各组大鼠断头取脑前再行NDS观察神经功能缺失症状;干湿重法检测脑组织含水量;免疫组织化学染色观察AQP-4和ET-1阳性细胞数的表达;western-blot法检测AQP-4的表达水平。采用SPSS13.0统计软件包进行数据分析。
结果:1.NDS结果:假手术组大鼠无神经功能缺失症状,评分均为“0”。亚低温组大鼠神经功能缺失症状明显优于常温组,各个时间点大鼠评分差异有统计学意义(P＜0.05)。2.脑组织含水量结果:MCAO模型后6h大鼠脑组织含水量开始增加,3d时达高峰,经亚低温处理后不同观测点的大鼠脑组织含水量明显低于相应的常温处理组(P＜0.05);脑组织含水量与AQP-4、ET-1的表达呈正相关(r＝0.717,r=0.698);假手术组不同时间观测大鼠的脑组织含水量无明显变化。3.免疫组织化学染色结果:常温组、亚低温组大鼠ET-1和AQP-4的阳性细胞数表达均较假手术组增高,3d时达高峰,5d时仍高度表达;亚低温组与常温组相比较,ET-1和AQP-4阳性细胞数均在6h后开始降低,24h后开始有统计学意义(P＜0.05),两者表达变化趋势一致,呈正相关(r＝0.963)。4.AQP-4 Western-blot半定量检测结果:假手术组AQP-4的表达较常温组、亚低温组减少;亚低温组与常温组比较AQP-4在6h开始降低(P＞0.05),24h、3d、5d时明显降低(P＜0.05),与AQP-4免疫组织化学染色结果趋势相同。
结论:1.亚低温能减轻局灶性脑缺血大鼠脑水肿,并改善神经功能缺失症状。2.亚低温能抑制局灶性脑缺血大鼠AQP-4和ET-1的表达,AQP-4和ET-1的表达存在时序上相关。