论文部分内容阅读
目的通过体外培养人脐静脉血管内皮细胞CIT中毒模型，观察CIT对血管内皮细胞增殖、凋亡的影响和作用机制。方法1.体外培养人脐静脉血管内皮细胞，用CIT毒素进行染毒处理。2.通过酶标仪(MTT)检测不同浓度CIT，不同作用时间对内皮细胞活性的影响。3.通过流式细胞术（FCM）检测不同浓度CIT，不同作用时间对内皮细胞凋亡及细胞周期的影响。4.通过蛋白免疫印迹方法（Westernblotting）检测内皮细胞凋亡调节蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9，PARP的表达水平。结果1.CIT降低人脐静脉血管内皮细胞的活性，浓度越高/作用时间越长细胞活性越减弱(P<0.05)。黄绿青霉素通过阻止人脐经脉血管内皮细胞中DNA的分裂使细胞滞留在G0/G1期，并使S期延长(P<0.05)。2．CIT在10μg/L，20μg/L的作用浓度均可引发细胞凋亡，高浓度CIT组凋亡更明显(P<0.05)。3.CIT染毒HUVECs的促凋亡蛋白Bax表达量增高，抑凋亡蛋白Bcl-2表达量降低，高剂量组变化更加明显（P<0.05）。4.CIT染毒组caspase-3和caspase-9的活化片段明显增高，PARP降解产物的含量也呈增高状态，且高剂量染毒组更加明显。结论1.CIT通过阻止人脐经脉血管内皮细胞中DNA的分裂使细胞滞留在G0/G1期，阻止细胞分裂增殖，从而降低血管内皮细胞的活性，且随CIT浓度的升高，滞留作用越明显。2. CIT可导致血管内皮细胞凋亡，并呈剂量-效应关系，由此引起的血管内皮损伤，或可在动脉粥样硬化、冠心病等发生中起到一定作用。3.CIT能够改变Bax/Bcl-2的比例形成同源二聚体，启动线粒体凋亡，上调活化的caspase-9含量，从而形成级联反应进一步活化caspase-3，并识别其底物PARP并使之降解从而阻止了PARP对损伤DNA的修复功能，最后导致细胞凋亡，而由此引起的血管内皮受损，可能成为引发动脉粥样硬化、冠心病的使动因素。