异硫氰酸苯乙酯影响膀胱癌细胞增殖及OPCML基因表达的实验研究

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目的:  观察异硫氰酸苯乙酯(PEITC)对膀胱癌细胞OPCML表达的影响,并探讨其在细胞生长增殖中的作用及可能的机制。  方法:  体外培养膀胱癌细胞系T24,用不同浓度 PEITC孵育后,采用MTT实验观察PEITC对T24细胞的增殖的影响;实时定量PCR和Western blot分别检测不同浓度PEITC对T24细胞中OPCML mRNA和蛋白表达影响;提取基因组DNA,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测 OPCML启动子上游甲基化状态,并测定PEITC处理前后细胞内甲基化活性的变化。同时采用实时定量PCR和Western blot分别检测细胞内DNMT1 mRNA和蛋白表达水平;最后建立裸鼠异种移植瘤模型,观察不同浓度PEITC对移植瘤生长的影响、OPCML和DNMT1的表达水平。  结果:  1.10,30和50μmol/L PEITC处理T24细胞后,MTT结果显示,在此浓度范围内T24细胞的增殖能力明显降低,并呈一定的时间依赖性。  2.实时荧光定量PCR结果显示,未处理组细胞中OPCML mRNA表达水平很低。而用10,30和50μmol/L PEITC处理后,随着PEITC浓度的递增,OPCML mRNA表达有所增加,OPCML蛋白表达水平趋势也与之类似。  3.MSP结果显示,PEITC可抑制OPCML启动子区域DNA甲基化,也能降低T24细胞内甲基化活性;同时,PEITC处理也能降低细胞内DNMT1的mRNA和蛋白表达水平。  4.PEITC可抑制裸鼠皮下肿瘤的生长以及移植瘤组织中DNMT1的表达,也能上调移植瘤中OPCML的表达水平。  结论:  1.PEITC能抑制T24细胞的增殖以及移植瘤的生长;  2.PEITC通过抑制T24细胞的甲基化活性,从而上调OPCML基因的表达而发挥作用。
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