海栖热袍菌热稳定性木聚糖酶基因的定向突变和表达研究

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外源基因在大肠杆菌中的表达量与序列本身密切相关,如密码子的偏好性、mRNA的二级结构和信号肽等等.该文通过DNA分析程序,对海栖热袍菌Thermotoga maritima木聚糖酶B基因的序列进行分析,找出可能影响该基因在大肠杆菌中表达的各种因素.从最主要因素着手,通过基因的定点诱变和定向改造技术对该基因的表达进行优化.得到一系列的突变基因,并将它们成功插入表达质粒pTrc-99A,得到一系列的重组质粒pTrc-99A-xynB、pTrc-99A-xynⅠ、pTrc-99A-xynⅡ、pTrc-99A-xynⅢ、pTrc-99A-xynⅣ,并将它们分别导入大肠杆菌JM109诱导表达.对重组菌(pTrc-99A-xynⅣ)产的重组木聚酶的酶学性质进行了初步的研究.该重组木聚糖酶的最适反应pH是5.4~5.8之间,最适反应温度大于100℃,在pH4.2~7.5范围内都比较稳定,该重组木聚糖酶的温度稳定性非常好,在90℃下保温2h酶活还有90﹪.对重组菌(pTrc-99A-xynⅣ)产的重组木聚糖酶降解木聚糖进行了研究,得出重组木聚糖酶主要降解木聚糖生成木二糖和木三糖,随时间增加会有少量的木糖生成.
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