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目的:恶性肿瘤是一种细胞分化障碍性疾病,其核心问题是正常细胞的分化受阻。大量实验表明,肿瘤起源于一些未分化或微分化的干细胞,是由于组织更新时所产生的分化异常。恶性肿瘤细胞丧失了正常分化的能力,表现为分化障碍和失控性增长,但仍具有和正常细胞相同的分化潜能。因此,利用分化诱导剂促使肿瘤细胞部分或者全部恢复分化潜能,转变为正常细胞的研究,成为抗肿瘤研究的新热点。肝癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一,最近国内外研究表明,许多分化诱导剂能促进肝癌细胞分化。姜黄素(curcumin)是一种酚性色素,近年来众多研究发现姜黄素具有抗肿瘤作用,其机制尚未明确,但目前普遍认为可能主要具有抑制肿瘤细胞生长、抑制肿瘤细胞侵袭与转移、诱导肿瘤细胞凋亡等机制,从而达到抗肿瘤的作用。本课题通过应用姜黄素作用于人肝癌细胞株BEL-7402,探讨姜黄素对肝癌细胞诱导分化作用,从而为姜黄素治疗肝癌提供理论依据。
方法:应用细胞培养技术培养人肝癌细胞株BEL-7402,经不同浓度姜黄素处理人肝癌细胞株后,用倒置显微镜观察人肝癌细胞株BEL-7402形态的改变;应用酶促反应方法测定细胞浆γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性,用免疫组化染色检测细胞浆中甲胎蛋白(AFP)合成情况,放免法测定细胞AFP和白蛋白(ALB)分泌量,观察细胞分化过程中分化功能的改变;用流式细胞术测定用药后细胞周期的变化。观察姜黄素对以上指标的影响。
结果:
①姜黄素对人肝癌细胞株BEL-7402在形态上的影响:姜黄素作用后细胞形态向成熟正常分化方向变化。
②姜黄素对人肝癌细胞株BEL-7402 γ-GT活性的影响:在培养过程中各姜黄素处理组γ-GT比活力逐渐下降,从第2天开始显著下降,自第3~5天开始下降缓慢,各实验组较同期培养的对照组细胞显著性降低(p<0.01)。而姜黄素10μmol/L、20μmmol/L实验组之间无显著性差异。
③姜黄素对人肝癌细胞株BEL-7402内AFP的影响:实验观察2天,细胞免疫组化结果显示,对照组细胞AFP表达较强,着色较深,呈棕黄色,主要成团浓集分布于胞浆中,实验组.AFP表达明显减弱,在胞浆内均匀分布,着色较淡,呈黄色。随着用药浓度的增加而着色是越来越淡。配合真彩色图像分析,每对照组和10μmmol/L、20μmmol/L实验组细胞AFP的每个细胞阳性色的光密度值分别为253.5、220.9、189.5。
④姜黄素对人肝癌细胞株BEL-7402AFP分泌量的影响:各姜黄素处理组AFP分泌量均在第2天开始就显著下降,随着作用时间的延长逐渐下降,第5天降至最低。实验组细胞AFP分泌量较同天培养的对照组细胞显著性降低(p<0.01)。而20μmmol/L 组较10μmmol/L组AFP分泌量更低(p<0.01)。
⑤姜黄素对人肝癌细胞株BEL-7402ALB分泌量的影响:各姜黄素处理组ALB分泌量自第2天开始明显升高,自第5天开始有小幅度下降,实验组细胞ALB分泌量较培养天数相同的对照组细胞显著性升高(p<0.01)。而20μmmol/L组较10μmmol/L组ALB分泌量明显增高(p<0.01)。
⑥姜黄素对人肝癌细胞株BEL-7402细胞周期的影响:姜黄素作用后,随着姜黄素浓度增加,人肝癌细胞株BEL-7402 G1/G0期比例逐步增高,由57.3%上升到69.8%,处于S期细胞比例逐渐减少,由29.7%下降至16.4%,说明姜黄素将人肝癌细胞株BEL-7402阻滞在G1期。
结论:姜黄素能使人肝癌细胞株BEL-7.402形态趋于成熟分化,细胞胞浆内γ-GT活性下降,细胞胞浆内AFP减少,细胞胞浆内ALB分泌增加,使细胞周期S期细胞减少。实验结果显示:姜黄素具有诱导人肝癌细胞株BEL-7402分化的作用。