ADAM17过表达对MCF-7乳腺癌细胞迁移力和侵袭力的影响

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目的:利用LV8N-ADAM17转染人MCF-7乳腺癌细胞,观察基因ADAM17被稳定表达上调之后对人MCF-7乳腺癌细胞迁移和侵袭力的影响。  方法:常规培养人MCF-7乳腺癌细胞。用携有红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)框架的慢病毒载体LV8N-ADAM17转染入人MCF-7乳腺癌细胞,转染后第24h更换新培养液,96h后利用荧光倒置显微镜观察RFP在MCF-7细胞中的表达状况。本实验分三组:转染组(转染过表达慢病毒载体的MCF-7细胞)、无义序列组(转染无义序列的MCF-7细胞)和对照组(未做转染处理的MCF-7细胞)。转染成功之后,real-time PCR法检测三组乳腺癌细胞中ADAM17、EGFR mRNA的表达情况;Western blot法检测三组乳腺癌细胞内ADAM17、EGFR蛋白表达情况;Transwell实验检测三组乳腺癌细胞的侵袭能力;细胞划痕实验检测三组乳腺癌细胞的运动迁移能力。  结果:1设置感染复数(multiplicity of infection,MOI)约为100,转染96h以后,于荧光倒置显微镜下观察,转染效率几乎达到100%。2real-time PCR检测结果为,ADAM17mRNA在转染组的表达量为1.79±0.08,无义序列组的表达量为1.16±0.07,对照组的表达量为1.13±0.05。EGFR mRNA在转染组的表达量为1.72±0.15,无义序列组的表达量为1.21±0.04,对照组的表达量为1.17±0.09。转染组ADAM17、EGFR mRNA表达量明显高于对照组、无义序列组,差异显著(P<0.05)。3Western blot检测结果显示,ADAM17蛋白在转染组、无义序列组、对照组的表达量分别为0.81±0.07、0.52±0.04、0.50±0.02。EGFR蛋白在转染组、无义序列组、对照组的表达量分别为1.43±0.24、0.86±0.06、0.88±0.17。转染组中ADAM17、EGFR蛋白的表达均明显高于无义序列组、对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。4Transwell侵袭实验结果显示,转染组、无义序列组、对照组的穿膜细胞数分别为101.00±6.19个/视野、76.35±6.41个/视野、79.20±10.04个/视野。转染组乳癌细胞侵袭力明显高于对照组、无义序列组,差异有统计学意义(P<0.05)。5细胞划痕实验检测结果表明,转染组、无义序列组、对照组划痕愈合率分别为70.67%±9.01%、37.00%±2.65%、39.00%±4.58%,转染组划痕愈合率明显高于对照组、无义序列组,差异有统计学意义(P<0.05)。  结论:用携带ADAM17的慢病毒转染人MCF-7乳腺癌细胞,能显著上调乳腺癌细胞ADAM17的表达,并可显著增强其迁移和侵袭能力。
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