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乙烯是一种具广谱作用的植物激素,在植物的各个生长发育时期都有重要的调控作用。上世纪60年代末,人们发现乙烯利(分解可以释放出乙烯)可以刺激橡胶树增产,随后将此技术迅速应用于生产并取得了巨大的经济效益。在推广应用此项技术的同时,植胶国的科技工作者从产胶生理、生化等角度,对乙烯利刺激橡胶树增产的机制进行了大量的研究,同时发现,乙烯利刺激加速橡胶树乳管衰老、促进橡胶树死皮病的发生等。但关于乙烯利作用的分子机制、在这些过程中扮演的真正角色目前并不清楚。为解析乙烯利刺激巴西橡胶树橡胶增产及加速乳管衰老的分子机制,本论文开展了如下研究并取得了部分研究结果:1、利用SSH技术成功构建了乙烯利刺激的橡胶树胶乳抑制差减文库,获取了118个阳性克隆。对随机选取的25个克隆进行的测序及序列分析表明,大部分基因序列属于未知或未知功能蛋白序列,只有少量的EST可以在模式植物中找到高度同源的对应基因。这暗示,可能有相当多的未知功能基因参与了乙烯利刺激橡胶树橡胶增产、加速乳管衰老的过程。2、生物信息学分析表明,NO.84EST与Ubiquitin基因具有较高的同源性。为获得该基因的全长序列,设计了5’RACE特有引物,运用SMART-RACE技术获得了该基因全长,命名为UBI。UBI基因cDNA全长核苷酸序列为771bp,拥有一个468bp的开放阅读框架,编码156个氨基酸。其中,5`UTR有77个核苷酸,3`UTR有226个核苷酸。核酸序列比对分析表明,UBI基因是一个Ubiqution extension protein基因,与其它来源的相应基因同源性在78%-90%之间;氨基酸序列同源性高达87.18%- 100%。3、利用Southern杂交技术对UBI基因的拷贝数进行了检测,结果表明该基因在橡胶树基因组中以单拷贝形式存在。以未处理、乙烯利处理3h、6h、12h、24h 5个时间段的橡胶树胶乳RNA为模板,以橡胶树Actin基因为内参基因,应用半定量PCR技术检测了基因的表达情况。结果显示,乙稀利处理12h,UBI基因表达最强,之后24h开始下降。这一结果暗示,该基因可能参与了乙烯信号的转导过程。4、建立了一种高效快速的橡胶树胶乳总RNA提取方法。紫外分光光度计和RT-PCR、RACE等分析结果表明,使用该方法提取的RNA质量完全能够满足相应的分子操作,但所需时间却只有目前常用方法的50%,RNA得率提高了2-3倍。本方法具有操作简便、用时少、得率高、提取的RNA质量好等特点,具有较强的实用性和可靠性。