前言 胰岛移植可为糖尿病病人提供生理性胰岛素,与胰腺移植相比具有手术创伤性小、可重复性好、安全、并发症少等优势。但胰岛移植尚未完全摆脱实验阶段,其临床开展无论是在数量上还是在质量上与胰腺移植相比均有很大差距。阻碍胰岛移植发展的关键在于:移植胰岛数量不足和免疫排斥反应。而免疫排斥一直是研究的热点。本实验拟在小鼠同种异体胰岛移植模型基础上,通过联合阻断CD28和ICOS,探讨胰岛移植中急性排斥反应的机制,以及CTLA-4Ig及ICOSmAb对移植胰岛功能的影响,防止排斥反应,提高移植物存活率。 材料与方法 实验动物:供者为近交系昆明小鼠,体重30±2g,雌雄不限,受者为雄性C57小鼠,体重30±2g,均购自中国医科大学动物中心。 糖尿病模型小鼠的制备:采用链脲霉素化学灼伤法制备糖尿病小鼠模型。腹腔内注射2%STZ,剂量为150mg/kg体重。监测随机血糖,如连续3天在非禁食情况下,血糖>16.8mmol/L,即为糖尿病模型制备成功。 胰岛分离纯化:采用明尼苏达大学改良方法,原位灌注消化、分离纯化胰岛。用含胶原酶(1.5mg/ml)的冷Hank’s液2-4ml灌注胰腺,使胰腺充分膨胀,完整切取胰腺。37℃水浴12-15分钟,低温离心(8℃,800rpm,2min),反复清洗2次。经40目不锈钢筛网过滤后再次离心(8℃,1000rpm,3min)。采用密度梯度离心法纯化胰岛,介质为Ficoll和Hank’s液的混合液,浓度分别为25%、23%、20.5%、11%。于23%和20.5%之间,及20.5%和11%之间交界处吸取胰岛。清洗后CMRL-1066培养液稀释备用。