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目的应用地塞米松(DEX)诱导的大鼠胰岛INS-1细胞凋亡模型。探讨糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)在糖皮质激素诱导胰岛β细胞凋亡过程中的作用及可能的分子机制,为进一步阐明类固醇性糖尿病的发生机制提供实验依据。方法1选用大鼠胰岛β细胞株INS-1细胞作为研究对象,首先应用MTT法检测不同浓度(0、0.01、0.1、1μM)DEX作用细胞1,2,3d时细胞增殖情况,确定DEX的最佳作用浓度和作用时间;2不同浓度DEX作用INS-1细胞48h后通过台盼蓝染色、Tunel染色和流式细胞术检测细胞死亡情况;3免疫荧光染色方法观察DEX诱导后,INS-1细胞中GSK-3β和p-GSK-3β(Ser9)的蛋白表达;4 0.1μM DEX处理INS-1细胞48h后,采用Real-time PCR方法检测SOD、i NOS、Nox4、NADPH oxidase(p47phox)和GSK-3βm RNA的表达;采用western-blot方法检测GSK-3β、p-GSK-3β(Ser9)、SOD、i NOS和Nox4蛋白的表达;采用ROS试剂盒、Griess法检测ROS及NO的释放水平。5观察加入GSK-3β抑制剂Li Cl后上述各项指标变化。结果DEX(0、0.01、0.1、1μM)作用INS-1细胞1--3天,随着DEX剂量和时间增加,INS-1细胞存活率下降;Tunel染色、流式细胞术证实0.1μΜ浓度的DEX作用INS-1细胞48h时,细胞出现明显的凋亡现象,并且与对照组相比,细胞培养上清中的ROS、NO水平升高,Nox4、p47phox、i NOS m RNA表达上调,SOD m RNA表达下调;i NOS、Nox4蛋白表达水平升高,SOD、p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达明显降低,总GSK-3β蛋白表达无明显变化。加入Li Cl后DEX诱导的细胞凋亡率明显下降,ROS、NO水平降低,Nox4、p47phox、i NOS m RNA表达及i NOS、Nox4蛋白表达均明显下调,p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达上调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论地塞米松可诱导大鼠胰岛β细胞凋亡,其机制可能与氧化应激反应增强、GSK-3β活性增加有关;抑制GSK-3β活性在一定程度上可减轻地塞米松诱导的细胞凋亡,其机制可能与减轻氧化应激反应有关。