番茄环斑病毒(tomato ring spot virus ToRSV)广泛分布于欧美，危害多种重要经济作物，严重者导致绝产，目前国内尚未发现，因此被我国列为一类检疫有害生物，应实施严格检疫。 目前广泛应用的植物病毒检测方法为血清学检测，其灵敏度及可靠性不能达到出入境检验检疫的要求。反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction RT-PCR)是一种快速灵敏的分子生物学检测方法，但存在漏检和假阳性现象。 本试验在RT-PCR的基础上设计了杂交诱捕引物及杂交探针，优化了杂交诱捕参数，建立了杂交诱捕RT-PCR-ELISA(hybridization capture RT-PCR-ELISA HC-RT-PCR-ELISA)。该方法的基本步骤是：将5’端氨基化的反向引物共价交链在PCR管上，在一定条件下特异性诱捕核酸粗提液中的靶标核酸，然后洗掉杂质及聚合酶抑制物质，完成核酸的诱捕。固相引物既参与核酸的诱捕，又参与PCR扩增。扩增中，在Taq酶的作用下，扩增产物沿着该引物延伸，形成一条固定在管壁上的链称之为固相产物。对液相产物进行凝胶电泳检测的同时对固相产物进行杂交检测。该方法将PCR与ELISA有机结合起来，利用了PCR的高效性与ELISA的高特异性，而建立的一种新的分子生物学检测技术。 作为一种新的检测方法，与传统的RT-PCR相比有如下改进：1)改变了核酸提取方法，利用杂交诱捕法直接从核酸粗提液中诱捕核酸，尤其适合于病毒含量低、Taq酶抑制物质含量高的植物材料，减少了核酸提取的时间及试剂费用。2)结果可靠：杂交特异性诱捕靶标片段的同时去除了核酸中存在的PCR抑制物质，减少了因核酸提取不纯造成的漏检现象，减少了非特异性扩增，结果输出通过双重判定，保证了结果的可靠性。3)灵敏度高：通过杂交进行结果判定，灵敏度比传统的RT-PCR大约高10倍，可以检测出10ug植物材料中的ToRSV。 实时荧光PCR(real time fluorescent PCR RT-F-PCR)是一种不需要进行凝胶电泳，而是在PCR反应中直接通过荧光探针杂交检测扩增产物的的方法。将杂交诱捕与实时荧光 PCR结合起来，诱捕后直接进行反转录 RTfPCR（HC－RTfPCR）检测，该方法检测灵敏度可达到 10fig。HC－RTfPCR方法比 HC－RTICRELISA方法减少了操作步骤；同时由于不走电泳也减少了核酸污染的可能，节省了检测时间，从核酸诱捕到病毒检测完成只需3h，提高了检测效率。 HC－RT－PCR－ELISA和 HC－RT－F－PCR同时作为的检测方法，结果输出都是通过探针杂交后仪器输出，灵敏度相当。前者仪器操作简单，费用低，易于推广应用。后者自动化程度高，工作量小，更快速，结果输出更直观，是一种很有应用前景的病原物检测方法，但目前仪器昂贵，试剂费用高，暂时还难以推广。 利用所建立的 HC－RT－PCR－ELISA和 HC－RT－F－PCR对法国进口的 6株怀疑感染有ToRSV的葡萄种苗进行了检测，发现四株带有TORSV，两种方法检测结果完全一致。从南瓜花叶病毒kquash mosaic virus SqMV）RNAZ保守序列设计引物，用HC－RTPCRELISA检测北京郊区采集的南瓜材料上的SqMV，结果发现所用的6个样品全部带有 SqMV，用巢式 PCR（Nest PCR）对检测结果进行了验证，证明了HC－RT－PCR－ELISA检测结果完全正确。 由于转基因产品（genetically modified organisms GMOs）潜在的非安全性及国际贸易争端，包括中国在内的许多国家，尤其是欧盟要求对进口产品进行转基因检测。355启动子、NOS终止子及 NPT 11基因是目前转基因检测常用的 3个基因。将180hp的 DNA片段包被到 PCR管上进行核酸诱捕，洗掉杂质后直接在该管内作PCR，结果3个基因全部检测出。而非转基因样品未检测到任何基因，证明了HC－PCR检测结果的准确性。