鳜鱼肉质营养成分分析及肌球蛋白重链基因克隆与表达

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随着生活水平的不断提高,肉质细嫩,味道鲜美的鳜鱼逐渐获得消费者青睐。为了解释鳜鱼的优良肉质性状,本研究采用生物化学和蛋白质化学方法,以鲢鱼为对照,对鳜鱼的三个品种——大眼鳜、斑鳜、翘嘴鳜营养成分进行了比较分析;利用RT-PCR/cDNA克隆技术克隆了鳜鱼肌球蛋白重链基因,并分析了鳜鱼组织和发育阶段表达的差异性。 1.营养指标测定。水分:105℃烘干失水法测定,野生大眼鳜为76.06%,斑鳜为76.16%,饲养的翘嘴鳜为81.43%、鲢鱼为82.10%;灰分:马福炉灰化法测定,鳜鱼干物质含量比较高;蛋白质:微量凯氏定氮法测定,野生大眼鳜与斑鳜的蛋白质含量均高于饲养翘嘴鳜和鲢鱼;脂肪:索氏抽提法测定,鲢鱼脂肪量高达5.25%,而翘嘴鳜、斑鳜、大眼鳜则只有1.09-2.18%;鱼油脂肪酸:气相色谱-质谱联用仪测定,翘嘴鳜、斑鳜、大眼鳜、鲢鱼四种鱼均含有的饱和脂肪酸为 C14∶0,C16∶0,C18∶0:单不饱和脂肪酸为 C16∶1,C18∶1;多不饱和脂肪酸为 C18∶2,C20∶5,C22∶6;并且大部分为中长碳链脂肪酸。斑鳜、大眼鳜、翘嘴鳜饱和脂肪酸含量依次为:24.40%,29.29%,35.75%;不饱和脂肪酸含量依次为:71.96%,67.82%,54.88%。鲢鱼检测出饱和脂肪酸含量28.37%,不饱和脂肪酸为42.05%。 2.获得MHC基因全长序列。鳜鱼MHC的cDNA全长为5938bp,含有3′转录序列124bp,两个结构域,一个5814bp开放阅读框(ORF),编码一个由1937个AA残基组成的蛋白质。SDS-PAGE和Western-blotting分析表明肌球蛋白重链基因在肌肉效应期之后开始表达,鱼苗和成鱼表达量较多,而在囊胚期、神经节期未见表达;在成鱼的肌肉表达量丰富,心脏有少量表达,脑、肾脏、脾脏等部位均未见表达。
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