目的：对兔膝关节软骨细胞进行体外琼脂糖凝胶滚压培养；探讨滚压载荷对软骨组织体外构建的可行性。　　 方法：　　 1.细胞培养及鉴定：无菌条件下取四周龄健康新西兰白兔双膝关节软骨，应用分阶段酶消化法，分离提取软骨细胞，20％胎牛血清的HG-DMEM作为细胞培养基，在37℃、体积分数为5％的CO2及饱和湿度条件下培养，每3天换液一次。取第3代软骨细胞，进行甲苯胺蓝、番红O-固绿、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色，以用作对软骨细胞的初步鉴定。　　 2.以分离提取的兔膝关节软骨细胞为种子细胞，以琼脂糖凝胶为支架，构建细胞/支架复合体。将细胞/支架共同培养48小时后，电镜观察支架内软骨细胞的黏附、生长情况。设置实验组A（8例）和对照组B(8例)，实验组滚压动态加载培养(每天定时滚压加载20min)，对照组正常体外静态培养。4周后观察标本大体形态，并对实验组和对照组进行HE染色和Ⅱ型胶原免疫组织化学染色，应用Image-proplus对Ⅱ型胶原免疫组织化学染色切片行Ⅱ型胶原半定量分析。　　 结果：　　 1.细胞形态学观察和鉴定：原代培养的软骨细胞贴壁较慢，24-36小时才开始贴壁变形。其外形多为多边形，胞浆丰富，胞核圆形，居中，有2-3个清晰可见的核仁。细胞长成一片时呈明显的铺路石状外观，与长梭形的成纤维细胞较易区分。首次传代细胞死亡略多，生长较慢，细胞呈梭形、多角形等多种形态。随着传代次数的增加，渐渐细胞以三角形、长梭形为主，出现集落生长倾向。取第3代细胞进行鉴别染色，甲苯胺蓝染色呈现蓝紫色，番红O/固绿染色出现典型的胞核黑色，胞浆绿色，软骨组织红色。Ⅱ型胶原免疫组织化学染色呈现棕黄色。　　 2.电镜观察和免疫组织化学检测：　　 实验组细胞/支架复合体较对照组表面更光滑，有光泽，周围有瓷白色半透明分泌物。凝胶细胞复合物滚压加载培养48小时后电镜下可见部分细胞已呈现梭形黏附在支架空隙中。4周后可见细胞体积增大，胞浆丰富，并分泌大量基质，细胞之间形成一定连接，具有生物学活性。HE染色发现，实验组软骨细胞在支架内增殖旺盛，软骨细胞呈圆形，排列紧密，被大量细胞外基质包围，融合成片。对照组软骨细胞增殖较弱，细胞排列稀疏，分泌的软骨基质较少，未融合成片。Ⅱ型胶原免疫组织化学检测发现，各组均有阳性染色，但实验组较对照组染色深、染色面积大。采用图像分析系统对棕黄色面积行染色面积计数，实验组阳性染色的面积为(60.67±6.41)％，对照组为（19.92±2.34）％，两者差异有统计学意义(P＜0.01)。　　 结论：在琼脂糖凝胶中培养的关节软骨细胞具有典型的软骨细胞特性，在滚压载荷培养下，能够正常合成细胞外基质，并形成具有一定弹性和抗压缩能力的软骨样凝胶块。滚压载荷刺激软骨细胞分泌Ⅱ型胶原，可以作为软骨组织体外构建的适当环境，但具体机制及作用尚需今后深入研究。