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背景:子宫内膜癌(Endometrial carcinoma,EC)是发生于子宫内膜的一组上皮恶性肿瘤。近年来,我国子宫内膜癌的发病率逐年升高,居女性生殖系统恶性肿瘤的第二位,目前仅次于宫颈癌,严重威胁女性健康。至今尚未找到有效预防和治疗子宫内膜癌的靶点。辣椒素是高香草酸衍生物,是全世界广泛应用的蔬菜和香料辣椒中的主要活性成分。辣椒作为传统药物已有上千年历史。辣椒素的外用膏药已被用于临床上治疗疱疹性神经痛、糖尿病神经病变患者疼痛和类风湿性关节炎患者疼痛等。近年来,大量研究表明辣椒素在多种肿瘤的发生、发展过程中通过其受体TRPV1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)依赖性或非依赖性途径发挥抗癌作用。但是辣椒素在人子宫内膜癌中的作用尚未见报道。目的:观察不同人子宫内膜癌细胞系辣椒素受体TRPV1的表达情况,并探讨分析辣椒素对TRPV1表达阳性的人子宫内膜癌细胞系的增殖、凋亡及细胞周期的影响,以期为子宫内膜癌的临床治疗提供新思路、新方法。方法:1细胞培养将人子宫内膜癌细胞系ISHIKAWA、HEC-1A、HEC-1B、KLE分别接种于含10%胎牛血清的DMEM/F12,DMEM培养液中,置于37℃、5%CO2的饱和湿度培养箱中培养。2 Western免疫印迹检测四种人子宫内膜癌细胞系的TRPV1表达将处于对数生长期的人子宫内膜癌细胞提取蛋白,Western-Blot检测其TRPV1的表达情况。3细胞增殖实验MTT法检测辣椒素刺激后细胞增殖情况选取TRPV1表达阳性的人子宫内膜癌细胞系,以不同浓度的辣椒素刺激不同时间,MTT法检测其体外增殖情况。4流式细胞检测分析流式细胞技术检测辣椒素刺激后细胞凋亡率和周期分布细胞凋亡检测:常规培养细胞至70%融合时,加入不同浓度辣椒素刺激,继续培养细胞24小时后,分别收集细胞。用预冷pbs洗细胞2次,离心弃上清,用含annexinv-fitc和pi染色液室温避光条件下孵育,然后用流式细胞仪检测细胞凋亡率。细胞周期检测:常规培养细胞至70%融合时,加入不同浓度辣椒素刺激,继续培养细胞24小时后,分别收集细胞。70%的乙醇固定,4℃过夜,pbs清洗后重悬,含rna酶的pi染液37℃孵育30分钟,送检。5统计分析:所有实验均重复三遍,数据采用spss21.0统计学软件进行处理。采用graphpadprism5.0软件进统计图制作,所有数据均以均数±标准差表示,采用one-wayanova分析,p<0.05为有统计学意义。结果:1trpv1蛋白在人子宫内膜癌细胞系中的表达:ishikawa细胞系表达trpv1蛋白,而hec-1a,hec-1b,kle细胞系均未检测到trpv1蛋白表达。2辣椒素对ishikawa细胞增殖活性的影响:随着辣椒素刺激浓度的增高和作用时间的延长,ishikawa细胞的增殖活性逐渐下降,辣椒素对体外培养的ishikawa细胞具有明显的抑制作用,且具有浓度和时间依赖性。3辣椒素对ishikawa细胞凋亡率影响:ishikawa细胞经0、200和400μmol/l辣椒素处理24h后,细胞凋亡率分别为:16.08±7.96%、60.93±2.99%、75.18±3.18%,其中早期凋亡比例分别为8.15±3.80%、54.02±6.46%和50.39±15.08%,晚期凋亡比例为7.93±7.60%、6.91±3.62%、24.79±13.36%,药物处理组总体凋亡率较对照组明显升高,且有浓度依赖现象,差异具有显著性(f=98.861,p=0.000),进一步分析显示ishikawa细胞凋亡主要集中在早期,200和400μmol/l辣椒素处后早期凋亡率均明显升高,且与对照组相比均有统计学差异(f=20.642,p=0.002),而晚期凋亡较对照组升高不明显(f=2.209,p=0.191),总的来说,辣椒素可明显诱导ishikawa细胞凋亡,随着凋亡率的增加,活细胞所占比例也显著减少。4辣椒素对ishikawa细胞周期分布的影响:分别以0、200和400μmol/l辣椒素处理24h后,ishikawa细胞周期分布如下:g0/g1期细胞比例分别为53.84±3.04%、59.43±2.69%和70.95±0.79%;s期细胞分别为26.38±8.32%、14.81±3.23%和20.48±1.84%;G2/M期细胞分别为19.78±7.53%、15.76±3.23%和8.57±1.28%,即药物处理组G0/G1期细胞所占比例较对照组明显增加,且差异具有显著性(F=7.950,P=0.021)。结论:1人子宫内膜癌ISHIKAWA细胞系表达TRPV1蛋白,而HEC-1A、HEC-1B和KLE人子宫内膜癌细胞系均未检测到TRPV1蛋白表达。2辣椒素可抑制体外ISHIKAWA细胞的增殖。3辣椒素可诱导体外ISHIKAWA细胞凋亡。4辣椒素可诱导体外ISHIKAWA细胞G0/G1期阻滞。