研究背景：环氧化酶(COX)是前列腺素(PGs)合成过程中重要的限速酶，COX有COX—1和COX—2两种形式，COX—1在人体多数组织中持续表达，维持机体正常的生理功能，对于生长因子，细胞因子等刺激COX—1的含量无明显变化；相反的，COX—2在正常人体绝大多数组织中无法检测到，仅在脑、肾和结肠组织中有少量的表达，而在各种细胞因子、生长因子和癌基因的诱导下，COX-2表达量可迅速上升。近年来，许多研究表明，多种肿瘤组织存在COX-2过度表达，COX-2表达上调或活性增加与肿瘤细胞的过度增殖和凋亡耐受存在一定联系，因此对COX-2的研究将作为恶性肿瘤防治的一个新靶点。有资料表明，COX-2特异性抑制剂—Celecoxib对许多实体恶性肿瘤具有抑制增殖、诱导凋亡作用。子宫颈癌是一种常见的妇科恶性肿瘤，对宫颈癌的治疗，目前以手术结合放化疗为主，这对早期宫颈癌可取得较好的疗效，但对于Ib期和中晚期宫颈癌的疗效并不理想。宫颈癌的化疗，在治疗晚期或复发转移的患者起着重要作用，因此寻找有效的子宫颈癌化疗药物具有重要意义。Hela系宫颈癌细胞株，是体外研究宫颈癌的良好模型。本研究用Celecoxib作用于宫颈癌Hela细胞株，观察Celecoxib对Hela细胞是否具有抑制增殖和凋亡诱导作用，并对Celecoxib抗宫颈癌作用的分子机制进行初步探讨。 目的：观察Celecoxib是否具有对Hela细胞增殖抑制、凋亡诱导的能力；检测Celecoxib干预Hela细胞株后COX-2 mRNA和P53mRNA的表达水平的变化。 方法：1用MTT比色法试验观察不同浓度的Celecoxib对Hela细胞活力的影响：实验组设Celecoxib终浓度分别为10μmol／L，20μmol／L，40μmol／L，80μmol／L，对照组加入等体积DMSO，每个浓度均设6个平行孔。酶标仪检测。计算细胞活力。2用20μmol／L的Celecoxib干预Hela细胞，对照组加等体积DMSO。用Hoechst33258染色鉴定Hela细胞凋亡的形态学特征。3用流式细胞仪分析Celecoxib作用Hela细胞24小时后的凋亡细胞百分率。4 半定量RT-PCR检测Celecoxib干预Hela细胞24小时后P53mRNA及COX-2mRNA的表达变化。结果以目的基因与β-actin的积分吸光度的比值表示。 结果：1MTT比色法实验显示随着Celecoxib浓度增高，细胞活力逐渐降低，Hela细胞各试验处理组细胞活力分别为对照组细胞活力的87％、46.3％、11.4％、6.2％、2％，试验组与对照组相比差异具有统计学意义(F=2251.2，P<0.05)．a Celecoxib抑制Hela细胞活力的IC<,50>为19μmol／L；2 Hoechst33258染色显示：对照组细胞核大小基本一致，为圆形或椭圆形，数量多，被染成均匀的淡蓝色；在20μmol／L药物浓度时，可见较多凋亡细胞，胞核明显缩小，形态不规则，大小不一，可见呈碎块致密浓染，形状不规则的细胞碎片(凋亡小体)；3流式细胞仪检测显示：经不同浓度的Celecoxib(0，10μmol／L、20μmol／L、40μmol／L、80μmol／L)干预24小时后，Hela细胞的早期凋亡率逐渐升高，分别为2.42％，9.56％，21.52％，32.59％，36.34％，试验组与对照组相比差异具有统计学意义(F=187.339，p<0.001)。4半定量RT-PCR检测结果显示实验组和对照组均在346bp处扩增出COX.2 mRNA特异性条带，在614bp处扩增出P53mRNA特异性条带，在550bp处扩增出β-actin特异性条带。Hela细胞中COX-2mRNA的表达水平随着Celecoxib剂量的升高而呈现降低的趋势。试验组与对照组相比，分别降低了17％、31％、52％、55％，除了40u mol／L与80μmol／L两组间(P=0.27>0.05)差异没有统计学意义，其余各组两组间差异均具有统计学意义。Hela细胞中P53mRNA的表达水平随着Celecoxib剂量的升高而呈现升高的趋势，实验组与对照组相比，分别升高了6％、27％、35％、57％，试验组与对照组相比均有显著性差异(F=179.2，P<0.05)。 结论：1 Celecoxib能够有效抑制Hela细胞的增殖，诱导Hela细胞凋亡，并呈药物浓度依赖性；2 Celecoxib能够下调COX-2 mRNA的表达。3 Celecoxib能够上调Hela细胞P53mRNA的表达。