【摘 要】
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在世界范围内,传染性疾病,尤其是致病性细菌引起的感染对公共健康造成了越来越严重的威胁。由于致病性细菌通常存在于很复杂的环境基质中,且其浓度也十分的低,为了能对其进行高灵
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在世界范围内,传染性疾病,尤其是致病性细菌引起的感染对公共健康造成了越来越严重的威胁。由于致病性细菌通常存在于很复杂的环境基质中,且其浓度也十分的低,为了能对其进行高灵敏的诊断,开发一种能对待测样品进行快速且生物亲和的富集方法显得十分必要。 在本项研究中,我们构建了一种四氧化三铁/万古霉素/聚乙二醇的磁性纳米载体,来用于对致病性细菌进行高效的富集,并能对富集到的细菌进行原位地基因组提取以便进行后续高灵敏的基因传感检测。万古霉素是一种著名的广谱抗生素,我们将它修饰到四氧化三铁纳米粒子的表面,来作为一种能对细菌细胞壁有特异亲和作用的细菌通用分子探针。聚乙二醇也被引入了这个纳米载体体系,用以改善纳米载体的生物亲和性以及在水中的分散性。 实验结果表明,即便在单增李斯特菌的浓度只有102 cfu/mL时,本项目所设计的纳米载体对细菌的富集效率也能达到90%。得益于聚乙二醇对纳米载体的修饰,纳米载体体系获得了良好的水溶性,使得在30分钟内就能获得高效的致病菌样品富集效果,其富集能力相对于没有标记聚乙二醇的纳米载体高了近10倍。更重要的是,聚乙二醇能通过与纳米粒子表面剩余的带正电性的活性氨基进行反应来使之钝化,以提高纳米载体的生物亲和性,这样就能在后续对富集到的细菌进行基因组提取时,帮助带负电的细菌基因组高效地从纳米载体/细菌复合体系中分离出来。我们所构建的纳米载体系统展现了良好的细菌富集能力和生物亲和性,为将细菌的前期样品制备和后续高灵敏的细菌基因传感检测技术的连接提供了有力的支持。在后续对分离的细菌基因组进行核酸检测的环节,我们应用了一项基于电化学发光的基因传感技术,使得能对单增李斯特菌进行快速、高灵敏的检测,其检测灵敏度达到了10 cfu/mL。我们构建的基于四氧化三铁/万古霉素/聚乙二醇的磁性纳米载体对致病性细菌进行富集/核酸传感一体化的检测系统展现了良好的细菌样品富集效果和高灵敏的细菌基因组检测能力,使得它在细菌的临床检测治疗中有极大的应用前景。
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