慢性髓性白血病(chronic myelogcnous leukemia，CML)是一种恶性肿瘤疾病，尼洛替尼是一种用于治疗CML的新型酪氨酸激酶抑制剂。目前，中西药联合应用治疗肿瘤已经成为临床药物治疗的重要手段。一般地，肿瘤患者在服用化疗药的同时大多会辅助使用一些中成药。而这些中成药多具有降低化疗药副作用、提高机体免疫力、抗肿瘤、逆转化疗药多药耐药的特点。中药五味子(Schisandra chinensis)具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心的功效，现代药理研究表明其能够保肝、增强机体免疫力，间接发挥抗肿瘤作用，能逆转化疗药的多药耐药。因此，肿瘤患者在服用抗肿瘤药物的同时非常有可能会联合使用五味子或其相关制剂(如五酯胶囊)。据报道五味子中的一些化学成分能够抑制细胞色素P450酶(CYP450，P450)活性，从而增加受P450酶代谢的底物的血药浓度。而尼洛替尼在体内也受P450酶代谢，代谢产物不具抗肿瘤活性。因此我们推测五酯胶囊能够通过抑制P450酶而与尼洛替尼发生代谢性药物相互作用，进而增加尼洛替尼的暴露水平，提高其疗效，减少其用量，同时减轻药物副作用，降低病人的经济负担。本课题期望利用药物相互作用有益的一面，拟通过研究五酯胶囊对尼洛替尼代谢、药动学和药效学影响，为五酯胶囊和尼洛替尼在临床上联合使用提供科学依据，为指导临床合理用药，发挥中西药代谢性相互作用优势提供新思路。　　目的：利用LC-UV和LC-MS/MS建立P450亚型探针药物代谢产物的分析方法并优化体外孵育条件；研究五味子化学成分及其制剂五酯胶囊对尼洛替尼体外代谢、体内药动学及药效学的影响。　　方法：　　(1)利用UV优化色谱条件，MS联用技术优化化合物离子对，来建立高通量快速筛选方法，考察微粒体蛋白浓度和孵育时间与代谢产物形成量之间的线性关系来确定蛋白浓度和孵育时间。　　(2)利用化学抑制剂和重组酶的方法鉴别参与尼洛替尼体外代谢的6种P450亚型；在人肝微粒体(human liver microsomes，HLM)和鼠肝微粒体(rat liver microsomes，RLM)体外孵育体系中，将五味子化学成分与各个探针底物共同孵育，考察代谢产物的生成速率，与对照组相比来反映五味子化学成分对P450的6个亚型(CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4)活性的抑制程度；在HLM和RLM体外孵育体系中，将五味子化学成分与尼洛替尼共同孵育，用LC-MS/MS检测尼洛替尼的消除量来反映五味子化学成分对尼洛替尼代谢消除的影响。　　(3)利用HPLC-MS/MS建立尼洛替尼体内分析方法；研究五昧子酯甲单次给药、五酯胶囊单次给药和多次给药(连续7天)对尼洛替尼药代动力学参数的影响，采用DAS2.0软件对药代动力学参数进行计算；五酯胶囊和尼洛替尼均每日给药两次，研究尼洛替尼给药后5h的血药浓度差异。　　(4)利用人K562细胞建立裸鼠CML皮下移植瘤模型，将动物随机分为6组(阴性对照组、五酯胶囊组、尼洛替尼组、低剂量五酯胶囊+尼洛替尼组、中剂量五酯胶囊+尼洛替尼组和高剂量五酯胶囊+尼洛替尼组)，连续给药7天，每周测定3次裸鼠的肿瘤体积。以给药第0天肿瘤体积为100％，计算其相对肿瘤体积平均数来反映对肿瘤生长的抑制情况。　　结果：　　(1)优化了体外肝微粒体孵育条件，建立了LC-UV和LC-MS/MS检测代谢产物的方法。　　(2)尼洛替尼主要受CYP3A4代谢；五味子化学成分对P450不同亚型有不同程度的抑制作用，而且在HLM和RLM中表现出不一致的IC50值，但是表现出共同的抑制趋势；五味子一些化学成分在体外能够不同程度抑制尼洛替尼的代谢。　　(3)五酯胶囊、五味子酯甲和0.5％CMCNa单次给药后尼洛替尼的药代动力学参数依次如下：AUC(0-t)为13455.94±2361.96，16361.68±2940.56，10055.37±1405.49μg/L·h。五酯胶囊和0.5％CMCNa多次给药后尼洛替尼药代动力学参数AUC(0-t)依次如下：17043.17±1726.45和11984.93±3444.54μg/L·h；二者均每日两次给药时，五酯胶囊干预组尼洛替尼的血药浓度显著高于阴性对照组(p<0.05)。　　(4)体内实验结果表明：阴性对照组、五酯胶囊组、尼洛替尼组和低、中、高三个剂量五酯胶囊合并尼洛替尼组裸鼠在最后一次给药后的肿瘤相对体积依次为(222.3±73.6，214.6±94.1，66.7±37.2，51.3±28.2，39.8±28.5和27.8±19.6)％。而且各组随着给药天数增加，肿瘤的相对体积逐渐下降。　　结论：　　(1)本实验建立的体外抑制方法均符合药物相互作用指导原则的要求，并可用于药物对P450抑制作用的筛选与评价研究。　　(2)五味子化学成分与尼洛替尼存在体外相互作用，且能够抑制尼洛替尼在肝微粒体中的消除。　　(3)五酯胶囊能够改变尼洛替尼的体内药代动力学行为，增加尼洛替尼在体内的暴露量。　　(4)五酯胶囊对裸鼠CML抗肿瘤作用无显著性意义；五酯胶囊高剂量能够提高尼洛替尼的抗肿瘤效果(p<0.05)，而且该效应呈现剂量依赖性。　　上述研究表明，五味子在体外能够抑制尼洛替尼的代谢，在体内能够增加尼洛替尼的体内暴露，而且在CML裸鼠皮下移植瘤模型上能够增加尼洛替尼抗肿瘤作用。该研究一方面建立了药物对P450抑制作用的筛选平台，另一方面从P450角度研究五味子和尼洛替尼的相互作用，能为临床中西药联合使用的合理用药评价提供技术平台和研究思路。