论文部分内容阅读
拟茎点霉属(Phomopsis)是半知菌亚门、腔孢纲、球壳孢目中的重要真菌类群之一。作为重要的植物内生真菌、病原菌和腐生菌,该属真菌在物种多样性、生物活性次生代谢产物、生态以及植物病害防控等领域有重要的研究价值。 本实验室近年从不同植物中分离得到了一系列拟茎点霉属内生真菌,前期对该属菌株进行了抗菌活性筛选以及TLC化学筛选,获得了三株活性菌株YM355364、YM311483、YE3250,已对菌株YM311483和YE3250进行了次生代谢产物的研究,提示该两株菌能够产生不同结构类型的新化合物。已有的研究结果表明拟茎点霉属内生真菌能产生新的次生代谢产物,值得进一步从中寻找结构类型更丰富的新活性物质,挖掘该属真菌中的有用资源。 本文在此基础上,对上述三株菌进行了基于ITS序列的系统发育分析,并结合菌株的菌落特征和显微形态特征,确定三株菌分别为拟茎点霉属中不同的种,且它们之间的亲缘关系较远,其中菌株YM311483和YE3250为潜在的新物种。本文对菌株YM355364进行了次生代谢产物的研究。选择PDB培养基对菌株YM355364进行扩大发酵和发酵产物的提取,采用硅胶柱层析、RP-18反相柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析等柱色谱分离方法,从该菌株的发酵产物中共分离获得了17个化合物。综合运用现代波谱技术(MS、1D-NMR、2D-NMR等)对分离获得的单体化合物进行结构鉴定,化合物1为甾醇类新化合物,命名为5α,15β-dihydroxy-6β-ethoxyergosta-7,22-dien-3-one(1),化合物2-17均为已知化合物,分别确定为dankasterone(2),cyathisterol(3),(24R)-6β-hydroxy-24-ethylcholest-4-en-3-one(4), hydroxyvertixanthone(5),isosclerone(6),对羟基苯甲醛(7),苯乙酸(8),3-吲哚甲醛(9),3-羟基吲哚(10),腺嘌呤核苷(11),N-hexadecanoyl-sphinganane(12),1-棕榈酸单甘油酯(13),9,10,11-trihydroxy-(12Z)-octadecenoic acid(14),8-hydroxy-9-octadecenoic acid(15),2-hydroxyoctadecanoic acid(16),(Z)-2-十九碳烯酸(17)。化合物的结构类型包括甾醇、葸酮、萘酮、苯环衍生物、吲哚、核苷、神经酰胺、脂肪酸甘油脂,表明菌株YM355364的次生代谢产物具有结构多样性的特点。化合物1-8和12为首次从拟茎点霉属真菌中分离获得,其中化合物2是具有独特的五元C环和六元D环结构的甾醇类物质。对化合物2、3、6、7、10进行了抗菌活性的初步检测,结果显示,化合物3和7对指示菌稻瘟霉(Pyricularia oryzae)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)显示出一定的抑菌活性。化合物3对稻瘟霉的最小抑制浓度(MIC)为128μg/ml。化合物7对稻瘟霉和枯草芽孢杆菌的最小抑制浓度分别为128μ g/ml、256μ g/ml。