拟南芥AtPLC5特异性抗体的制备及启动子活性的初步分析

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:sqqmyquanqs
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
磷酸肌醇特异性磷脂酶C广泛存在于真核生物中,是真核生物细胞信号转导途径的重要组分之一。PI-PLC可特异的水解4,5-二磷酸肌醇(简称PIP2),产生两个第二信使,即1,4,5-三磷酸肌醇和1,2-二酰基甘油。PI-PLC在植物对于诸如渗透压的改变、生长素及ABA的处理、光和重力的变化、病原菌的侵染等胞外刺激的响应,及授粉等发育过程的信号转导中发挥重要的作用。Ca2+是植物PI-PLC的重要调节因子。模式植物拟南芥基因组中,存在9个推测的PI-PLC基因(其中At3g55940和At2g40116两个基因到目前为止,尚未发现cDNA序列)。已报道的PI-PLC有AtPLC1S、AtPLC1F、AtPLC2和AtPLC6。在拟南芥第V染色体的一段13kb大小的DNA序列中,存在一个与AtPLC1S和AtPLC6顺序排列的基因序列,推测其编码PI-PLC。本实验室克隆到了这个基因的全长cDNA,并命名为AtPLC5。推测的氨基酸序列分析结果表明,其具有典型的植物PI-PLC的结构,既具有1个EF-Hand,1个X和Y结构域及C2结构域。结构上类似与动物细胞中的PI-PLCξ异型体。选择保守性较差的AtPLC5N端序列融合Flag-tag后原核表达作为抗原,通过免疫兔子,获得抗AtPLC5的多克隆抗体。该抗体只识别AtPLC5而不识别拟南芥中的其他6个PI-PLC异型体的原核表达产物。证明我们获得了AtPLC5的特异性多克隆抗体。用两相法分离质膜后,以该抗体进行的免疫印迹结果表明,AtPLC5存在于质膜组织和可溶性胞质中。即在拟南芥细胞中,AtPLC5以质膜结合蛋白和胞质可溶性蛋白两种形式存在。在AtPLC5启动子后融合GUS报告基因,得到转基因植株后的GUS染色发现,AtPLC5启动子驱动的GUS在叶柄、花药、柱头和荚端表达;经ABA等胁迫诱导后在根部和叶脉中表达。
其他文献
目的:氟是人畜必需的微量元素之一,适量的氟对机体各器官系统是有益的,但过量的氟对机体产生强烈的毒性作用,能造成机体多系统损害。肾脏是机体氟最主要的排泄器官,是氟损害的敏感
与能源政策和可持续发展之间的关系有关的决策的制定应该不仅包括对当前问题的鉴定和对未来影响的评估,而且为了增加这些政策成功的可能性还包括有关各方面的积极参与.因为一
二十国集团(G20)贸易部长会议取得丰硕成果,是中国任G20主席国期间的重要收获。这些成果分属于贸易与投资五大议题,即实现G20贸易投资政策合作机制化、促进全球贸易增长、促
本实验以抗(耐)菌核病显著差异的甘蓝型油菜近等基因系(甘蓝型油菜中油821(轮回亲本)和中R888×中油821的回交5代所组成的一对近等基因系)为材料,利用cDNA-AFLP技术寻找菌核病
本文通过对荣华二采区10
期刊
学位
本文通过对荣华二采区10
期刊
本文以采自甘肃省敦煌、民勤、金塔三地的盐生植物盐爪爪、罗布麻、苏枸杞为研究对象,测定了其叶片的生理生化指标,并观察了叶片的显微结构。旨在探索不同盐生植物在盐渍生
植物的衰老是一个极为复杂的生理生化过程,多年来人们对于植物衰老的调控机制开展了大量的研究,以期在理论上揭示植物衰老的生理生化机制。在农业生产实践中有目的地对植物衰老进行调控,以提高农作物的产量或延长农产品的贮藏期。 因此本研究正是基于小麦高产优质这一目的而开展的。对不同营养、水分的栽培模式下开花15天至花后32天这一期间小麦旗叶和倒二叶叶片分期采样,并对与叶片衰老有密切关系的酶活等相关指标进行了测
幼苗是被子植物个体发育中的一个特殊而重要的阶段,其内部解剖方面的特征在个体发育与系统演化上具有重要意义。本论文以猪毛菜,东方罂粟,白屈菜及飞扬草为材料,采用整体透明,石蜡