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目的:实验研究无花果提取物对人肺癌细胞增殖及凋亡的影响。探讨无花果提取物的抗癌功能及其作用机制。
方法:无花果干果,用75%酒精室温下浸泡,石油醚提取,低压40℃~50℃、旋转蒸发器浓缩至干,采用药剂方法,制备成无花果提取物即FE。用无花果提取物处理体外培养的人肺癌细胞人肺腺癌细胞株A549和悬浮的人小细胞肺癌细胞株LTEP-P,用完全培养液调整细胞浓度为1×104/mL,培养过夜使细胞贴壁,次日分别用不同剂量的FE各加0.1ml浓度分别为50mg/ml、100mg/ml、200mg/ml、400mg/ml的FE(FE用无血清RPMI1640稀释),分别处理肿瘤细胞和正常细胞,进行细胞增殖试验(MTT法),测定细胞存活率及半抑制浓度(IC50)。癌基因Bcl-2,SP法免疫组化检测,即分别接种人肺腺癌细胞株A549(为非小细胞肺癌,NSCLC)和悬浮的人小细胞肺癌细胞株LXEP-P(SCLC),置有盖玻片的六孔板内,5×105/孔,培养过夜,用20mgFE处理细胞。36h后加入Bcl-2(20μg/mL),继续培养12h,固定,细胞贴片,PBS冲洗,加生物素化二抗,DAB试剂盒显色。显微镜观察凋亡细胞。上述方法培养的A549和LTEP-P两株细胞,在指数生长期加入20mgFE,48h后收集各组细胞,4%多聚甲醛固定15min,PBS冲洗,离心所得沉淀中分别加碘化吡啶(PI)染液及TUNEL标记荧光混合染液30μl,室温15min,流式细胞仪检测FE对人肺癌细胞增殖及调亡的影响。所有实验数据计算均数和标准差,细胞增殖实验资料用方差分析处理,其他实验数据用卡方检验处理,如果P<0.05,认为差异有显著性。
结果:FE对人肺腺癌细胞株A549和小细胞肺癌细胞株LTEP-P两株细胞增殖均有抑制作用。随着剂量增加和时间延长增殖抑制作用增强,呈剂量和时间效应关系(P<0.05)。LTEP-P组肿瘤细胞IC50=20mg,A549组肿瘤细胞IC50=30mg,正常细胞IC50=40mg。免疫组化处理前后bcl-2的表达:镜下可见处理组较对照组的阳性细胞为减少,A549和LTEP-P两株细胞bcl-2表达的阳性率分别为(19±2)%、(34±4)%。分别和对照组比较,差异均有极显著性(尺<0.01)。流式细胞仪检测,发现处理组G0/G1期凋亡细胞数比对照组增加(尺<0.01)。处理组细胞自然凋亡率较高为(30.11±2.23)%,对照组为为(3.15±0.28)%(n=10),两者比较(尺<0.01)。
结论:FE复合物对小细胞肺癌和非小细胞肺癌细胞均增殖具有抑制作用,对后者更敏感。FE抑制肺癌细胞bcl-2基因表达,从而诱导肿瘤细胞凋亡。