【摘 要】
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该文以经大肠杆菌(E.coli)和金黄色葡萄球菌(staphylococcusarueus)诱导24小时的家蝇为材料,用异硫氰酸胍:酚:氯仿一步法,从家蝇腹部提取出完整的总RNA.然后采用亲和层析的方
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该文以经大肠杆菌(E.coli)和金黄色葡萄球菌(staphylococcusarueus)诱导24小时的家蝇为材料,用异硫氰酸胍:酚:氯仿一步法,从家蝇腹部提取出完整的总RNA.然后采用亲和层析的方法,分离、纯化出mRNA,逆转录合成cDNA,两羰加上EcoRI/NotI接头之后,与表达载体λgt11连接,经体外包装构建成了家蝇抗菌肽cDNA文库.文库的滴度达到了3.46×10<5>pfu/ml,重线率为99.6﹪.这为以后家蝇抗菌肽基因的克隆奠定了基础.根据昆虫防御素(edfensin)的同源氨基酸序列设计一对简并引物,PCR扩增用于构建文库的cDNA.将目的片段进行克隆、测序,得到了长为119bp的家蝇防御素基因片段,经基因库Blast检索证明为一新基因,与Aedesalbo的防御素defensinD的基因序列相似性达76﹪,为进一步文库筛选或进行3、5RACE而获得全长序列奠定了基础.
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