目的 β-连环素(B-catenin)既是Wnt信号传导通路中的关键分子,又是Ecadherin/catenin复合体中的重要成员。当β-catenin在细胞核内蓄积时,能激活Wnt信号传导通路,启动靶基因转录,导致细胞增殖、侵袭和转移。Axin(Axis inhibition protein)是Wnt信号传导通路的重要负性调节因子,介导β-catenin磷酸化,促进其降解。人类肿瘤中,这些重要分子的相关调控作用如何尚不清楚,分析其表达、探索其调控机制对于防治人类肺癌意义重大。本研究探讨Axin和β-catenin在肺癌中的表达和β-catenin突变情况,分析它们与各临床病理因素的关系,揭示Axin调控β-catenin和诱导肺癌细胞凋亡的机制。方法 (1)本研究采用44例新鲜肺癌及癌旁正常肺组织标本,均来自中国医科大学附属第一临床学院2003～2004年行外科切除手术的肺癌患者,患者术前均未接受过放化疗。 提取组织蛋白,采用考马斯亮蓝法进行蛋白定量。取等量蛋白,进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和转印,一抗(anti-Axin 1:50稀释,Anti-β-actin 1:500稀释)和辣根过氧化物酶标记二抗(1:50稀释)孵育后DAB显色。以β-actin为内对照,计算Axin的相对表达量。 使用Trizol试剂提取组织总RNA后,逆转录获得cDNA,均按说明书操作。PCR扩增Axin,产物长度为452bp,产物使用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测观察。以β-actin为内对照,计算Axin的相对表达量。 (2)100例肺鳞癌、腺癌及对应的癌旁正常肺组织标本来自中国医科大学附属第一临床学院2001～2003年外科手术切除之原发性肺癌及癌周正