不同灸法对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜紧密连接相关蛋白及水通道蛋白影响的研究

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目的:  观察不同灸法对溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)模型大鼠结肠黏膜水通道蛋白及紧密连接相关蛋白的影响,探讨艾灸治疗溃疡性结肠炎的作用机制,为灸法治疗UC提供科学依据。  方法:  按照随机分配方法,对42只SD大鼠进行分配,分成正常组9只和造模组33只。对造模组大鼠采取免疫学方法结合结肠局部刺激制备实验性UC大鼠模型。造模完成后在正常组中和造模组中各随机抽取大鼠1只进行模型鉴定。将剩下的造模大鼠随机分为模型组、隔药灸组、隔姜灸组和西药组四组,每组8只。隔药灸组与隔姜灸组均选取天枢穴(双)、大肠俞穴(双),进行隔药灸或隔姜灸干预,均每日1次,每次2壮,共治疗10天。西药组选用柳氮磺胺吡啶(SASP)溶液灌胃治疗共10天。干预结束后,观察大鼠一般情况,采用HE染色,光镜下观察结肠黏膜组织损伤程度,采用免疫组织化学SP法检测结肠黏膜组织ZO-1,claudin-1、-2、-3、-4、-12、-18a和AQP4,AQP8蛋白表达。  结果:  1.一般情况观察:与正常组比较,模型组大鼠活动迟缓,皮毛稀疏,体重增长缓慢,进食减少,易惊,肛周有粪便沾染,大便稀黄腥臭,或粘液血便。与模型组比较,西药组与隔药灸组、隔姜灸组大鼠一般情况均有不同程度改善。  2.结肠组织病理学损伤:与正常组比较,模型组大鼠结肠黏膜形态不完整,结构遭到破坏,上皮缺损、脱落,可见溃疡形成,腺体结构遭到破坏,黏膜及黏膜下层存在大量炎性细胞浸润,间质有明显充血水肿;与模型组比较,隔药饼灸组及隔姜灸组大鼠黏膜结构较为完整,炎性细胞较少,未见严重黏膜层炎性浸润,腺体较模型组排列规则;西药组大鼠上皮结构有些许破坏,黏膜层存在较少炎性细胞浸润。模型组大鼠结肠黏膜组织损伤评分较正常组明显增高(P<0.05);隔药灸组、隔姜灸组以及西药组结肠组织损伤评分显著低于模型组(P<0.05)。  3.结肠ZO-1,claudin-1、-2、-3、-4、-12、-18a蛋白的表达:与正常组比较,模型组大鼠结肠黏膜ZO-1蛋白表达显著下降(P<0.01,)claudin-1、-4、-12蛋白表达显著下降(P<0.05),claudin-2蛋白表达明显升高(P<0.05),claudin-18a蛋白表达显著增高(P<0.01);与模型组比较,隔药灸组、隔姜灸组大鼠结肠黏膜ZO-1蛋白表达显著增高(P<0.01),claudin-2蛋白表达显著下降(P<0.05, P<0.01),隔药灸组claudin-4蛋白显著升高(P<0.01),隔姜灸组claudin-12蛋白显著升高(P<0.05),隔药灸组、隔姜灸组大鼠结肠黏膜claudin-18a蛋白显著下降(P<0.01),西药组大鼠结肠黏膜ZO-1,claudin-4、-12蛋白表达明显升高(P<0.05),结肠claudin-18a蛋白表达显著降低(P<0.01),结肠claudin-2蛋白表达显著下降(P<0.05)。claudin-3蛋白在各组之间表达均无差异(P>0.05)。  4.结肠AQP4、AQP8蛋白的表达:与正常组比较,模型组大鼠结肠黏膜AQP4、AQP8蛋白表达显著下降(P<0.01);与模型组比较,隔药灸组、隔姜灸组大鼠结肠黏膜AQP4蛋白表达显著升高(P<0.05),AQP8蛋白表达显著升高(P<0.01,P<0.05),西药组大鼠结肠黏膜AQP4、AQP8蛋白表达显著升高(P<0.05)。  结论:  1.隔药灸和隔姜灸可明显改善UC大鼠结肠黏膜损伤;  2.隔药灸能上调UC大鼠结肠黏膜ZO-1、claudin-4的蛋白表达,下调claudin-2、claudin-18a的蛋白表达;隔姜灸能上调UC大鼠结肠黏膜ZO-1、claudin-12的蛋白表达,下调claudin-2、claudin-18a的蛋白表达;  3.隔药灸和隔姜灸均可上调UC大鼠结肠黏膜AQP4、AQP8的蛋白表达。
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