[目的]喉癌是常见头颈部恶性肿瘤之一,男性多见。课题组通过定量蛋白质组学技术,筛选得到喉癌相关蛋白磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶2(Phosphoenolpyruvate carboxykinase 2,PCK2),通过瞬时转染技术干扰PCK2后,初步探讨PCK2在低氧微环境中的表达及功能,为阐明喉癌发病的分子机制提供更多实验依据。[方法]1.分析低氧环境下喉癌SCC10A细胞的蛋白质组学结果,筛选出相关蛋白PCK2。2.通过Western Blot验证低氧环境下PCK2蛋白在喉癌中的表达。3.利用siRNA瞬时转染喉癌SCC10A细胞,采用Western Blot验证抑制PCK2表达后SCC10A细胞增殖的影响。5.测定下调PCK2后SCC10A细胞中ATP的含量及低氧环境下SCC10A细胞中ATP的含量。6.测定下调PCK2后SCC10A细胞中葡萄糖的含量及低氧环境下SCC10A细胞中葡萄糖的含量。7.采用侵袭迁移实验观察下调PCK2对SCC10A细胞侵袭迁移的影响。8.采用免疫组织化学的方法检测并分析喉癌组织切片及喉部非癌组织切片中PCK2蛋白的表达情况。[结果]1.低氧环境下SCC10A细胞存在105个上调蛋白,50个下调蛋白,选取PCK2这一上调蛋白作为目的蛋白。2.与常氧环境相比,在低氧环境下,PCK2表达上调。3.SCC10A-PCK2-siRNA组PCK2蛋白表达水平较SCC10A组及SCC10A-NC-siRNA明显降低(P<0.05),且干扰组PCK2-siRNA1中PCK2蛋白水平下降更明显,故选取PCK2-siRNA1组进行后续实验。4.24h、48h、72h后下调PCK2的SCC10A细胞的增殖均被抑制。5.下调PCK2的SCC10A细胞中葡萄糖含量低于阴性对照组及空白组细胞(P<0.05),低氧环境下的SCC10A细胞葡萄糖含量高于常氧环境下的SCC10A细胞(P<0.05)。6.下调PCK2的SCC10A细胞中ATP含量低于阴性对照组及空白组细胞(P<0.05),低氧环境下的SCC10A细胞ATP含量高于常氧环境下的SCC10A细胞(P<0.05)。7.下调PCK2的SCC10A细胞侵袭能力低于阴性对照组及空白组细胞(P<0.05)。8.下调PCK2的SCC10A细胞迁移能力低于阴性对照组及空白组细胞(P<0.05)。9.GLUT-1与PCK2在喉癌组织中的表达多呈阳性,在喉部非癌组织中多呈阴性(P<0.05),它们的表达率与喉癌分期及淋巴结转移呈正相关(P<0.05)。[结论]1.PCK2在低氧微环境中高表达。2.下调PCK2能抑制喉癌SCC10A细胞的增殖和侵袭迁移。3.GLUT-1与PCK2蛋白的表达与喉癌临床分期和淋巴结转移呈正相关。GLUT-1与PCK2在喉癌组织中的表达呈正相关。