雌性激素受体ER与PGR基因在经前期综合征模型动物下丘脑中的表达研究

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经前期综合征(Premenstrual Syndrome,PMS),是指一组反复发生在经前,影响妇女日常生活和工作,涉及躯体和精神两方面的症候群。PMS是育龄妇女发病率较高的疾病之一,在20~40岁之间的女性最为普遍。但由于采用的诊断标准和个体反应性的不同,其发病率差异很大,据估计育龄妇女中约90%至少有一种PMS症状,而大约有20~40%的妇女正常生活会到影响。PMS的病因及发病机制目前仍不明确,多数学者研究认为,中枢神经系统和其它靶组织器官出现的PMS症状,可能是由于正常卵巢排卵引发的一系列复杂的神经内分泌反应的结果。近年来,有关PMS病因和病理生理的研究涉及环境、内分泌系统、中枢神经系统之间的相互作用以及遗传因素。目前比较集中的一个研究方向是雌激素和孕激素在中枢神经系统调控网络中的作用。与研究地日渐透彻的雌性激素在PMS发病中的作用相比,目前关于其中枢神经系统受体在PMS发病过程中的表达情况却仍就缺乏充足的研究。本论文的研究内容是作为PMS肝气逆证模型动物发病分子机理研究的一个部分,以PMS模型猕猴和大鼠为对象,将PMS发病与下丘脑内雌性激素受体的表达情况联系起来,探究PMS实验动物模型下丘脑中雌性激素受体的表达情况,为探明雌性激素及其受体在PMS发病中的作用机理提供实验依据。首先提取猕猴下丘脑总RNA,反转录获得总cDNA,参照已报道的猕猴ERa、ERB、PGR基因设计引物,利用巢式PCR的方法扩增得到上述受体基因,构建载体质粒并转化大肠杆菌培养扩增;以质粒载体所含目的基因片段为模板体外转录制备地高辛探针标记ERa、ERβ、PGR基因的cRNA探针,组织切片原位杂交分析ERa mRNA、ERβmRNA、PGR mRNA在PMS模型猕猴下丘脑和正常猕猴下丘脑中的表达差异;同时,采用免疫组织化学分析ERB蛋白在PMS模型猕猴下丘脑和正常猕猴下丘脑中的表达情况;并且使用simplePCI软件分析对实验结果进行统计分析。结果显示,ERa mRNA、ERβmRNA在PMS模型猕猴下丘脑中转录水平的表达相对其在正常猕猴下丘脑中的表达均出现下调;ERβ蛋白在PMS模型猕猴下丘脑中的表达相对其在正常猕猴下丘脑中的表达亦出现下调现象;PGR mRNA在PMS模型猕猴下丘脑中转录水平的表达相对其在正常猕猴下丘脑中的表达出现上调。大鼠实验方面,利用雌性性成熟wistar大鼠构建PMS肝气逆证模型,以与猕猴实验类似的实验方法路线研究ERa mRNA、ERβmRNA、PGR mRNA和ERβ蛋白在PMS模型大鼠下丘脑与正常大鼠下丘脑内的表达差异;同时,提取PMS模型大鼠下丘脑和正常大鼠下丘脑总RNA进行RT-PCR分析。结果显示ERa mRNA、ERβmRNA在PMS模型大鼠下丘脑相对正常大鼠下丘脑内的表达水平均出现下调;、PGR mRNA在PMS模型大鼠下丘脑相对正常大鼠下丘脑内的表达水平出现上调。我们的实验结果显示,PMS猕猴和PMS大鼠下丘脑内雌激素受体表达出现下调而孕酮受体表达出现上调,我们认为这可能对雌性激素与下丘脑内其它激素和递质相互作用起到了弱化作用,涉及5-HT、GABA和CRH等与精神活动密切相关的调控系统。
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