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本文采用不完全随机的交叉实验设计方法,通过32天的大鼠喂养实验,评价大鼠摄食不同水平的大豆和肉类后,肠道硫化物的产生数量,变化趋势。以了解不同来源的食物蛋白质与肠道硫化物的关系。为进一步探讨人类食物结构及为溃疡性结肠炎的预防提供线索。
研究方法:7月龄的24只健康成年雄性SD大鼠为实验对象,将相同体重的两只大鼠分为一笼,12笼大鼠按配伍组设计方法随机分成2组,一组喂动物蛋白、一组喂大豆蛋白,每组6笼。按不完全随机的交叉试验设计,每组大鼠在代谢笼中先后饲以4个实验水平(含4个不同比例)的大豆或肉类饲料,每一水平喂养8天共32天的实验膳食。大豆或肉类的摄入水平从10%-90%。每一水平实验期间的第7、8天准确记录大鼠食物摄入量,收集24小时大鼠全部的粪便样品,称重。为防止硫化物分解和氧化,新鲜粪便硫化物以硫化锌沉淀的形式收集,-4℃保存。室温下通过微蒸馏过程,用氮气将硫化氢吹出,被氢氧化钠吸收,采用亚甲蓝分光光度法测定粪便中的硫化物浓度。在第7、8天,采用常规尿液收集程序,准确收集24小时尿样。记录尿样体积,全部尿样-20℃保存,以测量尿液硫酸盐总量。尿液经过酸化水解、离心后,铬酸钡比色法测定尿中的硫酸盐含量。采用SPSS11.5软件录入数据,数据分析结果以均数±标准误((-x)±SD)形式报告,粪硫化物、尿硫酸盐及饲料蛋白质比例作回归统计分析。
研究结果:(1)实验期间每只大鼠体重试验前后无变化,其体重的平均值为豆组375±27.39g/只,肉组366.67±25.82g/只((-x)±SD),两组大鼠体重无统计学差异,p>0.05。(2)实验期间大鼠粪便重量均数:豆组8.39±2.04(SD)g/d/cage,p<0.0001;肉组6.45±1.85(SD)g/d/cage,p<0.0001。肉、豆组内不同喂养水平间粪便重量存在差异。(3)实验期间每组大鼠食物摄入量均数:豆组49.56±7.52g(SD)g/d/cage,p<0.0001;肉组66.80±14.44g(SD)g/d/cage,p<0.0001。各组内不同喂养水平间大鼠食物摄入量存在差异。(4)实验期间每组大鼠平均蛋白质摄入量:豆组11.53±3.65(SD)g/d/cage,p<0.0001;肉组10.1±3.53(SD)g/d/cage,p<0.0001。大鼠蛋白质摄入量在组内不同喂养水平间存在差异。多个样本均数的两两比较,大豆组p<0.05,随着饲料中大豆比例增加大鼠大豆蛋白质摄入量增多;肉组内除10、40%水平组p>0.05,其余各实验水平大鼠蛋白质摄入量不同,p<0.05,饲料中肉比例大于40%以上时,随着饲料中肉比例的增多,肉蛋白质摄入量也增加;大鼠蛋白质摄入量在肉豆组组间比较,10%组p>0.05,40%、70%、90%组p<0.05,同一摄入比例下,肉、豆在饲料中含量大于40%时,两组间蛋白质摄入量有显著差异,豆组蛋白质摄入量大于肉组蛋白质摄入量。(5)大豆组大鼠粪便硫化物浓度均数0.27±0.14ummol/g(SD),p<0.05。豆组各喂养水平之间粪硫化物浓度总的来说存在差异;粪硫化物浓度的样本均数两两比较(LSD):大豆含量90%与10%、90%与40%的两组,p<0.05,粪硫化物浓度差异显著。而10%、40%、70%组间p>0.05,粪硫化物浓度差异无显著性。此外粪便硫化物浓度与饲料中大豆含量百分比的相关、回归分析显示:从10%至90%的浓度范围内,随饲料中大豆比例的增加,粪便中硫化物的浓度增加,呈正相关关系,回归方程y=0.129+0.003x(r=0.614,p<0.001)。(6)肉组大鼠粪便硫化物浓度均数0.19±0.11ummol/g(SD),p>0.05。显示肉组各喂养水平之间硫化物浓度差异无显著性。粪便硫化物浓度与饲料中肉含量百分比的相关、回归分析显示:从10%至90%的浓度范围内,随着饲料中肉类所占比例的增加,鼠粪中硫化物浓度逐渐下降,呈负相关关系,回归方程:y=0.274-0.002x(r=-0.428,P<0.05)。显示大鼠摄食肉类对大肠硫化物产物的产生可能具有保护作用。(7)肉豆组间粪硫化物浓度的比较,70%水平下,p<0.05;90%水平,p<0.0001。肉和大豆在饲料中的比例大于70%时,肉豆两组粪硫化物浓度存在差异,推测大鼠摄入同一重量比例的肉、大豆时,高浓度下大豆对粪中硫化物的贡献大于肉类。(8)大豆组各不同喂养水平,大鼠尿硫酸盐总量均数1.20±0.76mmol/d/cage,p<0.0001。豆组各喂养水平之间尿硫酸盐总量存在差异;样本均数两两比较(LSD):40%、70%比较组p>0.05;其它各喂养水平间,p<0.05,除相近的40%、70%两组外,其余各组尿硫酸盐总量差异显著。此外尿硫酸盐总量与饲料中大豆含量百分比的相关、回归分析显示:从10%至90%的浓度范围内,随饲料中大豆比例的增加尿硫酸盐总量也增加,呈正相关关系,回归方程y=0.174+0.019x(r=0.794,p<0.0001)。(9)肉组不同喂养水平,大鼠尿硫酸盐总量均数1.26±0.76mmol/d/cage,p<0.0001。显示肉组各喂养水平之间尿硫酸盐总量总的来说存在差异;肉组尿硫酸盐总量的样本均数两两比较(LSD):40%、70%组,p>0.05,其余各喂养水平间p<0.05。此外尿硫酸盐总量与饲料中肉含量百分比的相关、回归分析显示:从10%至90%的浓度范围内,随饲料中肉比例的增加,尿硫酸盐总量也增加,呈正相关关系,回归方程y=0.278+0.019x(r=0.761,p<0.0001)。(10)肉和大豆在饲料中的比例相同时,豆组和肉组组间尿硫酸盐总量的比较的独立样本t检验,p>0.05,显示尿硫酸盐总量在肉豆组间差异无显著性。
研究结论:
1、大鼠肠道硫化物的产生量既与蛋白质在食物中的比例有关,也与蛋白质的种类有关。肉类蛋白质和大豆蛋白质的数量都能影响大鼠肠道硫化物的产生。
2、大鼠尿硫酸盐总量与蛋白质摄入量呈正相关关系。