论文部分内容阅读
目的类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜的慢性炎症性增生、骨与软骨组织进行性的破坏并伴有多种自身抗体产生为特征的系统性自身免疫病。抗环瓜氨酸化多肽抗体(Anti-cyclic citrullinated polypeptide antibodies,ACPA)现已普遍应用于临床上RA的辅助诊断与疾病的预测评估中,但仍有部分RA患者血清学结果是阴性。本文从免疫组学角度探索血清IC及结合滑膜组织抗原的表达情况,为寻找新的生物标志物提供理论基础。方法用PEG沉淀法从4份混合血清中(其中(1)ACPA(+)RA患者41例,(2)ACPA(-)RA患者14例,(3)系统性红斑狼疮(SLE)41例,(4)健康体检者41例)提取免疫复合物及Ig G-γ球蛋白。将提取的ACPA(+)RA混合血清Ig G-γ球蛋白分别与ACPA(+)RA、ACPA(-)RA、骨性关节炎、健康人的滑膜组织提取的全蛋白液进行反应。然后将血清IC以及滑膜中提取的抗原通过免疫共沉淀(IC)、胶内酶解后进行质谱分析。各组之间总蛋白用Vennny 2.1.0进行差异比对。RA组蛋白FOT(fraction of total)值大于对照组(疾病与健康对照)FOT值的2倍判定为上调蛋白,小于对照组FOT值0.5倍判定为下调蛋白。利用STRING软件对实验组差异蛋白进行进一步功能分析。结果1 RA组IC中特异出现的蛋白有129种,其中:ACPA(+)RA组有38种,ACPA(-)RA组有109种,两亚组之间有18种蛋白相同。RA组与对照组共有的蛋白中,共计12种蛋白表达上调:ACPA(+)组有2种蛋白,ACPA(-)RA组有11种蛋白。ACPA(+)RA组共计17种下调蛋白,而ACPA(-)RA组有21种下调蛋白。2在ACPA(+)RA组IC中共发现28种瓜氨酸化肽段,16种瓜氨酸化蛋白,主要为角蛋白家族、桥粒蛋白、组蛋白及补体成分;在ACPA(-)RA组IC中共发现62种瓜氨酸化肽段,30种瓜氨酸化蛋白,主要为角蛋白家族、组蛋白、载脂蛋白、纤连蛋白、桥粒蛋白及补体成分等。3 ACPA(+)RA滑膜组织中特异出现的蛋白有77种蛋白,ACPA(-)RA滑膜组织中特异出现的蛋白有90种蛋白。RA组与对照组共有192种蛋白,ACPA(+)RA组有41种蛋白表达上调,ACPA(-)RA组有34种蛋白表达上调。RA组共有9种蛋白表达下调。4在RA患者滑膜组织中共鉴定出32种瓜氨酸化肽段,16种瓜氨酸化蛋白。其中,在ACPA(+)RA组共发现26种瓜氨酸化肽段,12种瓜氨酸化蛋白,主要为角蛋白家族、胱天蛋白酶、胶原蛋白、纤维连接蛋白等;在ACPA(-)RA组共发现18种瓜氨酸化肽段,11种瓜氨酸化蛋白,主要为角蛋白家族、组蛋白、纤维连接蛋白、胶原蛋白等。只在ACPA(+)RA组特异出现的瓜氨酸蛋白有3种;只在ACPA(-)RA组特异出现的瓜氨酸蛋白有4种。结论1 RA血清循环免疫复合物中共鉴定出141种潜在自身抗体靶抗原,其中仅在RA中特异出现的抗原有129种。ACPA(-)RA血清循环免疫复合物中差异蛋白数量、种类均要多于ACPA(+)RA,纤维蛋白原、肌球蛋白、热休克蛋白-90等多种已知RA相关蛋白的上调为部分ACPA结果阴性但最终发展为RA的患者提供了很好的证据支持。2 RA滑膜组织中共鉴定出207种潜在自身抗体靶抗原,有145种抗原仅在RA滑膜中表达,ACPA(-)RA来源的滑膜组织表达的RA相关抗原谱更加全面。磷酸丙糖异构酶、硫氧化还原蛋白5、抗氧化蛋白Peroxiredoxin等蛋白在ACPA(-)RA滑膜中上调,为探究血清学结果阴性RA相关潜在自身抗体靶抗原提供新的解释。3 RA患者血清IC中共鉴定出72种瓜氨酸化肽段,33种瓜氨酸化蛋白。ACPA(-)RA血清IC中瓜氨酸化蛋白数量、种类要均明显多于ACPA(+)RA。同时我们发现ACPA(-)RA滑膜中也有多种瓜氨酸化蛋白沉积,包括各种亚型的角蛋白、胶原纤维、组蛋白等,虽然样本例数较少但是仍具有较为重要的提示意义:即ACPA阴性患者体内也存在着瓜氨酸化现象,只不过利用现有的技术手段没有发现而已,因此寻找新的血清学标记物对提高ACPA阴性患者的检出率具有重要的价值。