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目的初步评价肠道病毒71型(Enterovirus 71, EV71)、甲型肝炎(甲肝)病毒(Hepatitis A, HAV)与乙型肝炎(乙肝)病毒(Hepatitis B, HBV)联合疫苗中三种抗原之间的相互作用及其免疫小鼠诱导的特异性免疫应答水平。方法将EV71灭活疫苗抗原、HAV灭活疫苗抗原及重组HBV疫苗抗原(HBsAg)按常规剂量,以直接吸附法吸附AI(OH)3佐剂,配制成EV71-HAV-HBV联合疫苗,并设二联疫苗组、单苗组、佐剂对照组和空百对照组(PBS)。分别于0、28d各经腓肠肌免疫BALB/c小鼠一次,于初免后2、4周和第二剂免疫后2、4、8、16、28周经尾动脉采血,分离血清。采用微量中和试验检测血清EV71中和抗体效价；采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测血清中Anti-HBs、Anti-HAV水平。于初免后3、4周和第二剂免疫后第1、2、4周经尾动脉采血,用流式细胞仪检测小鼠全血中淋巴细胞亚群CD4+/CD8+的百分率及小鼠血清中TNF、IFNy、IL-5、IL-4、IL-2含量,同时取小鼠脾脏,分离得到脾单个核细胞(mononuclear cell, MNC),采用酶联免疫斑点试验(enzyme-linked immunospot assay, ELISPOT)检测MNC中抗原特异性FNy的分泌水平。结果各疫苗组小鼠血清Anti-HBs和Anti-HAV阳转率分别在第二剂免疫后第2周和第4周达100%,EV71中和抗体只有部分组达到100%；佐剂对照组和空白对照组抗体均无阳转。初免后第4周,疫苗组CD3+、CD4+细胞百分率较高,第5周均有不同程度的下降；CD8+细胞百分率第3周最高,第4周有不同程度的下降。第二剂免疫后第1周,三联疫苗组5种细胞因子水平较其他组高,提示三联疫苗组在第二次抗原刺激时能较早的产生细胞因子相关的免疫应答。各疫苗组分泌IFNy的斑点形成细胞(spot forming cell, SFC)数在5个检测时点有所波动,第二剂免疫后第1周,HBsAg多肽和EV71全病毒刺激产生的IFNγ分泌阳转率均达到100%,同时SFC数也达到峰值；HAV全病毒刺激产生的IFN-γ水平在5个时间点的检测结果均为阴性；佐剂和空白对照组的ELISPOT检测结果均为阴性。结论一定剂量的EV71-HAV-HBV联合疫苗具有较好的免疫原性,可迅速诱导小鼠产生良好的体液免疫应答和一定水平的细胞免疫应答,三种抗原间未发现相互作用。