探讨灼烧技术在治疗慢性扁桃体炎中对β-防御素-3表达的影响

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目的:在灼烧技术(原灼烙技术,经国家名称规范后称灼烧技术)治疗慢性扁桃体炎前后进行扁桃体组织取材,检测人β-防御素-3(HBD-3、hBD-3)在扁桃体组织中的表达,探讨灼烧技术在治疗慢性扁桃体炎中对hBD-3表达的影响,为阐明灼烧技术的治疗原理、指导临床工作提供理论依据。方法:1.试验分组:选择慢性扁桃体炎病人15位,健康志愿者15位;在灼烧前,选取15位慢性扁桃体炎病人的扁桃体组织标本15例做为本次试验的A组(以下简称灼烧治疗前组);本次试验的15位慢性扁桃体炎患者,经灼烧治疗治愈后,观察6月无复发,再次钳取扁桃体组织标本15例做为本次试验的B组(以下简称灼烧治愈组);健康志愿者15位,选其扁桃体组织标本15例纳入本次试验的C组(以下简称健康志愿组)。2.A、B、C组,进行石蜡包埋组织并切片制作病理标本,从形态学观察及免疫组织化学检测hBD-3。3.分别提取A、B、C组扁桃体组织总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测标本中hBD-3转录水平的表达。4.A、B、C组,提取扁桃体组织用Western blotting检测hBD-3在蛋白水平的表达。结果:1.苏木精-伊红染色结果显示:a组是慢性扁桃体炎组织,b组、c组为正常扁桃体组织,无慢性炎症。2.免疫组化半定量积分分析hbd3表达结果,a组15个标本中有强阳性、阳性、弱阳性的例数分别为12、2、1;b组15例有14例阴性、1例弱阳性;c组15例中有14例阴性、1例弱阳性。选择秩和检验,灼烧治疗前组的hbd3在免疫组化中的表达量明显高于健康志愿者组,且差异显著,具有统计学意义(p<0.05)。灼烧治疗前组hbd3在免疫组化中的表达量明显高于灼烧技术治愈组,且差异显著,具有统计学意义(p<0.05)。3.rt-pcr结果显示a组观察到约182bp的片段,在约为182bp处有明亮的单一条带显示,与设计的hbd3片段长度一致。b组、c组均在约为182bp处有较灰暗的单一条带显示。选择t检验,灼烧治疗前组hbd3基因的表达量明显高于健康志愿者组,且差异显著,具有统计学意义(p<0.05)。灼烧治疗前组hbd3基因的表达量明显高于灼烧技术治愈组,且差异显著,具有统计学意义(p<0.05)。4.westernblotting的检测结果显示a组可见分子量约5kd较深的条带,与预期的hbd3蛋白分子量大小相同。而b组、c组分子量约5kd较浅的条带。选择t检验,灼烧治疗前组hbd3蛋白的表达量明显高于健康志愿者组,且差异显著,具有统计学意义(p<0.05)。灼烧治疗前组hbd3蛋白的表达量明显高于灼烧技术治愈组,且差异显著,具有统计学意义(p<0.05)。结论:1.当扁桃体组织存在慢性炎症时,可诱导hbd3从基因、蛋白水平的表达升高,发挥其调节扁桃体局部免疫、抗微生物的功能。2.灼烧技术治愈慢性扁桃体炎后,扁桃体组织中hBD3基因、蛋白的表达数量下降。3.灼烧技术治疗慢性扁桃体炎的机理可能是下调扁桃体组织中hBD3基因、蛋白的表达数量,代替hBD-3发挥着调节免疫、抗微生物作用。
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