论文从以下几个方面进行论述：　　 一、立题依据和目的　　 同种异体肾移植是目前国际公认的治疗慢性肾功能衰竭（终末期）尿毒症的最佳选择，全球每年肾脏移植数量已逾数万例。中国自20世纪60年代初开展该项工作以来，目前每年的肾脏移植数量约有6000～8000例，名列全球第二，仅次于美国。由于免疫抑制剂的发展和临床移植水平的提高，我国肾移植近期效果已得到了显著的改善。有关的资料表明，五年生存率大于90％，但是肾移植的远期效果至今却未能得以相应的提高，移植肾的平均半寿期仍徘徊在7～10年。目前，威胁肾移植患者长期生存最主要的问题是药物毒性、心血管疾病、病毒性感染、排斥反应等。在临床上，大量免疫抑制剂应用所诱发的感染已成为器官移植患者感染和死亡的重要原因，其中人巨细胞病毒（HumanCytomegalovirus，HCMV）感染使免疫功能受到抑制，机体抵抗力过度下降，HCMV和免疫细胞相互作用，引起炎症反应、移植器官排斥反应，出现多脏器功能衰竭，严重的HCMV感染可造成移植肾功能丧失；HCMV还可引起间质性肺炎，并发急性呼吸窘迫综合征，病情进展迅猛、治疗棘手、预后极差，是移植受者死亡的重要原因之一。国外报道，肾移植术后HCMV感染率为59％-79％，HCMV感染相关死亡人数占肾移植近期总死亡人数的2％。因此控制病毒的感染就能在一定程度上延长移植肾的存活时间，也就能提高病人的存活率，降低死亡率。　　 临床上早期诊断和预防HCMV感染具有重要的意义。近年来，实时荧光定量PCR(FQ-PCR)技术，广泛应用于病毒感染的检测，特别是在巨细胞病毒感染的诊断方面发挥着重要作用。实时荧光定量PCR(FQ-PCR)技术具有特异性强、灵敏度高、定量准确、在线实时监测，结果直观的特点。动态检测血和尿中HCMVDNA载量，可很好地反映机体内HCMV病毒量，而且取材方便、无创、易于接受，因此该方法正在普及使用。　　 标本采集对FQ-PCR的结果影响较大，目前多采用血液标本，也见晨尿标本提取模板用于检测的资料报道。为了提高HCMVDNA的检出率和检测的敏感性，本研究对取自肾移植患者血液标本、晨尿标本与二次浓缩尿标本进行了对比研究，发现二次浓缩尿沉渣检测HCMVDNA，敏感性更高，检出时间更早，同时对肾移植术前、术后的HCMVDNA载量进行了动态监测，为临床及时采取抗病毒治疗提供了客观依据，为提高移植肾存活率、延长存活时间奠定了基础。　　 二、实验方法　　 1．研究对象：2007年1月至2009年12月在山东省千佛山医院进行肾移植手术并坚持随访的165例患者，其中男98例，女67例，年龄14～64岁（平均44.3岁），其中尸体肾移植116例，亲体肾移植49例，分别于肾移植术前、术后第2～8周每周1次、第9～24周每2周1次收集标本。同时设健康人群100例作为正常对照组。其中男58例，女42例，年龄20～60岁（平均41岁）。　　 2．标本采集及制备方法：　　 2.1原尿沉渣标本制备：取1mL晨尿12000r/min离心5min获取沉淀，为原尿沉渣试验组；　　 2.2二次浓缩尿沉渣标本制备：取晨尿5mL，2500r/min离心5min，弃上清液4mL，留离心管底部1mL再做12000r/min离心5min，取沉淀为二次浓缩标本组；　　 2.3空腹采血2mL、EDTA钠抗凝并2000r/min离心5min，取血浆用于试验。　　 3．HCMV-DNA提取与检测分析：原尿沉渣和二次浓缩尿沉渣及血浆均用FQ-PCR检测试剂盒（广州中山大学达安基因诊断中心产品）检测分析，按说明书操作。根据本实验室诊断标准，拷贝数高于（包括）1.0×103拷贝/ml判为阳性。　　 4．临床干预治疗：将原尿沉渣和/或二次浓缩尿、血标本监测HCMV-DNA阳性组进行更昔洛韦(GCV)抗病毒干预，连续静脉滴注4周。剂量严格按照药物使用说明（湖北科益药业股份有限公司生产）计算，肾功能正常者剂量为5mg/kg，每12小时静脉滴注2.5mg/kg；肾功能减退者，肌酐清除率(SCr)50～69mL/min时，每12小时静脉滴注2.5mg/kg；SCr25～49mL/min时，每24小时静脉滴注2.5mg/kg；SCr10～24mL/min时，每24小时静脉滴注1.25mg/kg；SCr＜10mL/min时，每周3次，每次1.25mg/kg，于血液透析后给予。治疗过程中采用血和尿（原尿和二次浓缩尿）两种标本同时进行病毒拷贝数的动态观察，以了解病毒拷贝数与临床症状之间的关系。　　 三、结果　　 1．正常对照组100例、肾移植患者165例术前原尿沉渣、二次浓缩尿沉渣及血浆HCMV-DNA检测结果为阴性（肾移植术前165份二次浓缩尿沉渣标本中有两例HCMVDNA拷贝数低于1.0×103拷贝/ml）。　　 2．肾移植术后HCMV-DNA在不同标本检测率的比较证实在肾移植术后165例患者中，原尿沉渣组有42例检测到HCMV-DNA，检出率25.45％；64例患者二次浓缩尿沉渣中检测到HCMV-DNA，检出率38.79％，二者比较差异有统计学意义（x2=6.727，p＜0.01）；血浆有30例检测到HCMV-DNA，检出率18.18％，与二次浓缩尿组比较，差异有统计学意义（x2=8.598，p＜0.01）；结果表明二次浓缩尿标本检出率高于原尿沉渣和血浆标本。　　 3．肾移植术后HCMV-DNA在不同标本拷贝数的比较:165例患者中，采用二次浓缩尿标本有64例检出HCMV-DNA，DNA拷贝数为2.88×103～8.16×106拷贝/ml，平均拷贝数为1.07×106拷贝/ml；原尿沉渣标本有42份检出HCMV-DNA，病毒拷贝数为1.00×103～6.16×106拷贝/ml，平均拷贝数为3.67×105拷贝/ml。将来自同一患者、相同采集时间的原尿沉渣组和二次浓缩尿沉渣组检测结果进行比较，病毒拷贝数原尿沉渣组低于二次浓缩尿沉渣组，经配对资料秩和检验，差异有统计学意义(U=4.772，p＜0.01)。原尿和二次浓缩尿不同数量级的检出数之间比较，发现二次浓缩尿高数量级的例数较原尿组多。　　 4．比较肾移植术后HCMV-DNA检出时间发现两种标本病毒DNA检出高峰均出现于第6～8周，但二次浓缩尿术后第3周检测到8例，而原尿沉渣检出2例，分别占总检出率的12.50％和4.86％；术后至第4周，原尿沉渣检出8例，二次浓缩尿沉渣检出17例，分别占19.00％和26.56％，表明二次浓缩尿检出病毒DNA的时间早于原尿沉渣标本。　　 5．动态监测临床抗病毒干预过程中的HCMV-DNA显示术后二次浓缩尿沉渣标本与原尿沉渣标本均检测HCMV-DNA阳性的64例患者进行抗病毒干预后，采用原尿沉渣和二次浓缩尿沉渣方法进行病毒DNA跟踪监测，发现56例病毒基因拷贝数有显著下降，并在1～2周后HCMV-DNA转为阴性；有8例下降缓慢者出现临床症状，表现为低热、乏力、淋巴结肿大，咽喉疼痛，关节酸痛等，咳嗽，胸部CT诊断为间质性肺炎，经加强抗病毒及抗感染治疗后临床症状消失，HCMV-DNA转为阴性。　　 四、结论　　 1．改进标本的采集和处理方法，即二次浓缩尿标本，HCMVDNA检出率率显著高于原尿、血浆标本，提前了预警时间。　　 2．不同处理方法的标本HCMVDNA载量检出结果不同，二次浓缩尿检测DNA拷贝数高于原尿组，说明提高了实验的敏感性，更有利于早期诊断。　　 3．利用定量动态监测手段及早期抗病毒干预治疗，能明显抑制HCMV病毒的复制，减缓临床症状，提高移植人肾存活率。