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第一部分测定母体血浆游离DNA分析预测胎儿RhD血型 背景:RhD阴性孕妇怀有RhD阳性胎儿时可引起胎儿出现溶血，导致胎儿水肿、缺氧、黄疸、贫血甚至宫内死亡，同时增加早产的发生率。因此，RhD阴性孕妇胎儿RhD血型的产前诊断对胎儿溶血病的预防和早期干预具有重要意义。 目的:基于MALDI-TOF MS方法分析母体血浆游离DNA预测胎儿RhD血型。 方法:(1)本实验收集2013年8月至2015年3月中国人民解放军总医院和北京妇产医院开展产前检查的孕20～40周RhD阴性健康单胎孕妇的外周血，其丈夫为RhD阳性;(2)利用MALDI-TOF MS方法分析检测孕妇血浆游离DNA RHD基因外显子4、5、7、10以及RHD1227A判断胎儿RHD基因型预测胎儿RhD血型，其判断结果与产后新生儿脐血血清学检测结果进行对比分析。 结果:收集40例RhD阴性孕妇的外周血游离DNA，经过MALDI-TOF MS分析胎儿RHD基因外显子4、5、7、10及RHD1227A，共发现1例RhDel型，1例RhD阴性及38例RhD阳性。35例皆得到产后脐带血的血清学验证。结果与产前胎儿RhD血型预测结果相符，5例RhD阳性跟踪失访。 结论:利用MALDI-TOF质谱分析技术所建立的无创产前预测RhD阴性孕妇胎儿RhD血型的方法准确可靠，可用于临床开展。 第二部分利用孕妇血浆游离DNA检测胎儿FGFR3基因热点突变 背景:软骨发育不全是胎儿短肢畸形常见的原因之一，但常在妊娠26周以后出现典型表现，临床诊断有一定局限性。98％的基因突变均发生在FGFR3cDNA1138位点，这使得ACH产前诊断成为可能。 目的:探讨MALDI-TOF MS质谱技术无创产前检测ACH致病基因FGFR3热点突变的可行性，以期实现妊娠中期筛查胎儿软骨发育不全。 方法:收集2014年2月到2015年3月解放军总医院妇产科收治的3例经超声检查发现四肢短小的胎儿羊水或脐血标本及其父母的外周血。3个家系父母双方表型正常，提取其外周血基因组DNA，应用直接测序方法对FGFR3基因常见突变位点c.1138进行检测。排除染色体核型异常外，提取母体外周血游离DNA，应用MALDI-TOF MS进行FGFR3基因c.1138位点检测，判断胎儿有无此常见致病位点突变，并应用胎儿羊水或脐血基因组DNA进行验证。 结果:3个家系父母双方正常，未携带FGFR3 c.1138位点突变。胎儿核型分析为46条染色体，结构无异常。MALDI-TOF MS结果考虑2个胎儿为FGFR3c.1138 G＞A杂合型突变，1个胎儿未检测到c.1138 G＞A，与后续从胎儿羊水或脐血提取的基因组DNA直接测序验证结果相符。 结论:MALDI-TOF质谱分析技术可为无创产前诊断胎儿软骨发育不全提供新的手段，有望用于妊娠中期胎儿软骨发育不全的筛查，但仍需大量临床标本验证。