茶多酚对H2O2诱导大鼠晶状体上皮细胞中NF-κB、Caveolin-1表达的干预作用

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目的建立离体H2O2诱导的大鼠白内障模型并观察茶多酚(Tea Polyphenols,TP)对H2O2诱导大鼠晶状体上皮细胞中转录因子核因子-kB(nuclear factor.KappaB,NF-kB)和小窝蛋白-1(caveolin-1, CAV-1)表达的影响,研究晶状体造成氧化损伤的主要原因和机制,以及茶多酚对其所产生的保护作用,进一步为氧化损伤性白内障的预防、治疗寻找到更新的、更好的方法和重要的理论依据。方法采用离体晶状体培养技术,在一定浓度H2O2的MEM培养液中置入透明的SD大鼠晶体,建立实验性白内障晶状体模型。设置空白对照组、H2O2组和茶多酚(0.02mg·ml-1、0.2mg·ml-1、2mg·ml-1)处理组,分别于不同时间点(6h、12h、24h、48h)取样,对其进行形态学的观察,运用免疫组织化学方法染色计数晶状体上皮细胞中NF-kB、caveolin-1阳性表达的细胞,并应用RT-PCR检测晶状体上皮细胞中NF-kB、caveolin-1mRNA的表达,Western-blot免疫印迹分析晶状体上皮细胞中NF-kB、caveolin-1蛋白表达量的变化。结果空白对照组大鼠离体晶状体在培养的48h内无显著变化,晶状体均保持透明,H2O2组大鼠离体晶状体在培养的过程中,随着H2O2对晶状体作用的时间的逐渐延长,48h内,原来呈透明状的晶状体,其混浊的程度也会逐渐步的越来越重。而在不同浓度的茶多酚实验组中,其中的晶状体的混浊程度的进展与H2O2组相比较则要缓慢许多,并且在不同时间段的晶状体的混浊程度与H2O2组相比较也都明显减轻许多。H2O2上调晶状体上皮细胞中NF-kB的表达,且呈时间依赖性(P<0.01),不同浓度的茶多酚均可抑制晶状体上皮细胞中NF-kB的表达;H2O2下调晶状体上皮细胞中Caveolin-1表达,呈时间依赖性(P<0.01),不同浓度的茶多酚均可抑制晶状体上皮细胞中Caveolin-1的表达的减少,在各组中,晶状体在不同的时段中,上皮细胞中NF-kB、Caveolin-1的阳性表达率和表达量的比较、各实验组与H2O2组相比,差异均有统计学意义(P<0.05),茶多酚浓度为0.2mg·ml-1时抑制效果最显著(P<0.05)。结论NF-kB、Caveolin-1均存在于正常晶状体上皮细胞中,在白内障晶状体上皮细胞中,随着H2O2作用时间的延长,NF-kB的表达逐渐增加,Caveolin-1表达逐渐减少。茶多酚可以抑制H2O2诱导的晶状体上皮细胞NF-kB的增加和Caveolin-1表达的减少,以茶多酚浓度为0.2mg·ml-1时的作用效果最佳。
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