论文部分内容阅读
小麦赤霉菌[Fusarium graminearum Schwabe]是小麦、大麦和玉米等作物的主要病原菌之一。其典型病害是引起小麦赤霉病。小麦赤霉病致使作物产量和品质下降，其产生的真菌毒素对人和动物造成伤害。本实验基于反向遗传学的策略，运用split PCR的方法构建含有hph（潮霉素磷酸转移酶基因）的基因敲除盒，通过PEG介导的原生质体转化和体内同源重组得到抗潮霉素的转化子;对转化子进行PCR筛查，得到PCR阳性FgCPKR基因缺失突变体，根据该突变体表型变化及致病性的检测对FgCPKR基因的功能进行分析，获得到以下结果: 1.以小麦赤霉菌野生型PH-1基因组DNA和质粒pCB1003 hph基因，采用split-marker技术，成功构建了FgCPKR基因敲除盒。 2.用所得敲除盒，通过PEG介导转化小麦赤霉菌原生质体，获得转化子。经PCR筛查，得到3个PCR阳性FgCPKR基因缺失突变体(△fgcpkr)。 3.表型分析可见，△fgcpkr菌落生长速度减慢。液体培养基中，△fgcpkr显示明显温度敏感性，当温度升高到32℃时，即可见到菌丝顶端膨大。自交实验发现，△fgcpkr不能产生正常形态的子囊壳，说明有性生殖受到影响。侵染实验显示，△fgcpkr对玉米丝和小麦穗的致病力减弱，表明FgCPKR基因与小麦赤霉菌致病相关。