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目的:从细胞骨架探讨金粟兰属二萜化合物对乳腺癌细胞增殖的抑制作用及其作用机制。方法:采用MTT法检测金粟兰属植物中萃取分离出来的29个单体化合物,从中选出能够明显有效抑制乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞增殖的单体化合物,并进一步探讨抗乳腺癌作用及其作用机制。利用MTT法观察不同浓度的化合物S-36B对MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞增殖的影响;并筛选出合适的给药浓度,MDA-MB-231细胞给药组设置为1.57umol/L,7.89umol/L,63.09umol/L,MDA-MB-468细胞给药组设置为1.57umol/L,15.77umol/L,63.09umol/L;运用SRB法测定化合物S-36B给药组对MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞增殖的影响;利用平板克隆形成实验观察各给药组对细胞克隆形成能力的影响;利用生长曲线实验观察不同浓度的化合物S-36B在不同的作用时间下抑制MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞增殖的情况。采用Phalloidin-FITC法标记两种乳腺癌细胞骨架蛋白F-actin,在倒置荧光显微镜下观察化合物S-36B对其形态变化的影响;采用免疫荧光标记法,检测在化合物S-36B作用下,α-Tubulin蛋白在两种乳腺癌细胞中的表达情况;进一步采用Western Blot法检测化合物S-36B对MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中p-Cofilin、p-LIMK1、Akt、p-Akt(Ser473)、p70S6K、p-p70S6K(Thr389)、α-Tubulin等蛋白的表达情况。结果:1、MTT实验结果,MDA-MB-231细胞在化合物S-36B各浓度作用下抑制率为16.87%±0.0439、44.22%±0.0777、75.12%±0.0562、80.16%±0.0703、85.05%±0.0098、85.22%±0.0132(与空白组比较,浓度为1.57umol/L,7.89umol/L,23.66umol/L P>0.05,浓度为15.77umol/L,47.32umol/L,63.09umol/L P<0.05);MDA-MB-468细胞在化合物S-36B各浓度作用下抑制率为13.86%±0.0508、22.09%±0.0799、47.02%±0.0406、64.74%±0.0810、83.51%±0.0293、85.31%±0.0074(与空白组比较,浓度为1.57umol/L,7.89umol/L,23.66umol/L P>0.05,浓度为15.77umol/L,47.32umol/L,63.09umol/L P<0.05)。2、SRB实验结果,MDA-MB-231细胞在化合物S-36B各给药组作用下,存活率为85.83%±0.0409、48.65%±0.0465、17.81%±0.0071,在阳性药物紫杉醇浓度为0.003umol/L时,存活率为82.61%±0.0360(P<0.01)。MDA-MB-468细胞在化合物S-36B各给药组作用下,存活率为81.70%±0.0667、48.85%±0.0436、17.26%±0.0186;在阳性药物紫杉醇浓度为0.003umol/L时,存活率为83.01%±0.0399(P<0.01)。3、细胞平板克隆形成实验结果,MDA-MB-231细胞在化合物S-36B各给药组作用下,克隆率为29%±0.0508、1.6%±0.0102、0、0,在阳性药物紫杉醇浓度为0.003umol/L时,克隆率为1%±0.0037(P<0.01),MDA-MB-468细胞在化合物S-36B各给药组作用下,克隆率为19.53%±0.0267、0.73%±0.0024、0.07%±0.0009、0,在阳性药物紫杉醇浓度为0.003umol/L时,克隆率为1.06%±0.0033(P<0.01)。4、细胞生长曲线实验表明,化合物S-36B均能抑制MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞的增殖,且两种细胞均呈时间依赖性、剂量依赖性。5、细胞肌动蛋白微丝F-actin实验结果表明,与空白组相比较,在不同浓度S-36B作用下,MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞骨架蛋白F-actin表现为排列逐渐紊乱,表达量降低,细胞伪足慢慢减少。6、细胞免疫荧光实验结果显示,与空白组相比较,MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞随着给药浓度的增加,α-Tubulin蛋白在细胞核周围分布逐渐减少,荧光强度降低。7、Western blot实验结果表明,在化合物S-36B作用下,p-Cofilin、p-LIMK1、Akt、p70S6K 4个蛋白的表达明显下调,p-Akt(Ser473)、p-p70S6K(Thr389)、α-Tubulin无显著性差异。结论:1.化合物S-36B对体外培养的MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞有显著的抑制作用。2.化合物S-36B抑制乳腺癌细胞增殖可能涉及磷酸化LIMK1/Cofilin信号通路活性,可通过下调LIMK1/Cofilin蛋白的磷酸化水平进而影响细胞骨架的架构。