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团头鲂(Megalobrama amblycephala)是我国特有的养殖鱼类,在我国淡水养殖业及淡水捕捞业中占有重要的经济地位。团头鲂具有养殖成本低、生长快、成活率高、易捕捞,肉质好等优点,在我国广受青睐。发掘其生长发育相关主效基因,培育优良品种,是水产动物遗传育种基础研究的重要内容。然而,当前以团头鲂为首的鳊鲂鱼类天然资源已衰退严重,其基因库也受到了威胁。另外,鳊鲂鱼类由于地理分布上的叠加,形态和生活习性较为相近,在自然条件下有可能相互交配,从而造成种质混杂,原种鉴别日益迫切。成纤维生长因子受体(fibroblast growth factor receptor 1,Fgfr1)属于Fgfr家族,是一种酪氨酸激酶受体。它参与调控细胞的生长、分化、增殖和转移,对动物早期的胚胎发育和器官形成具有重要的作用。在哺乳动物中,Fgfr1通常由2-3个Ig-like胞外配体结合域、一个富含丝氨酸的特异酸框、一个转膜域和一个高度保守的酪氨酸激酶结构域,这四个结构域构成。Fgfr1通过与其相应的配体和HSPG的偶联,从而触发一系列的信号调控(如:PKC信号通路、PI3K/PKB信号通路和Ras/ERK信号通路等),对机体的生长发育等方面产生调节。研究一:为对我国主要鳊鲂鱼类群体进行群体鉴定和遗传多样性分析,从60对微卫星标记中筛选出18对多态性高的引物,构建了6个鳊鲂鱼类群体的微卫星DNA指纹图谱。结果显示,东江三角鲂、钱塘江三角鲂、厚颌鲂、广东鲂、团头鲂和长春鳊6群体的平均等位基因数(Na)分别为5.17、6.11、3.50、6.56、5.22、5.22,平均期望杂合度(He)分别为0.6342、0.7204、0.5462、0.6812、0.6752、0.5597,平均多态信息含量(PIC)分别为0.5756、0.6669、0.472、0.6306、0.6064、0.517,表明钱塘江三角鲂的遗传多样性最高,厚颌鲂的遗传多样性最低;聚类分析表明,钱塘江三角鲂和团头鲂首先聚为一支,遗传距离较近,为0.5606;厚颌鲂与长春鳊的遗传距离最远,为1.7592。引物Mam03和EST37产生的特异条带可将鲂属和鳊属鱼类区分,鉴定出鳊属鱼类长春鳊;引物TTF3、EST37、TTF2/TTF10、EST66依次组合可区分出鲂属东江三角鲂、厚颌鲂和广东鲂这3个群体。研究结果为我国鳊鲂鱼类种质资源保存、种群鉴定和良种选育奠定了基础。研究二:采用c DNA末端快速扩增(RACE)的方法克隆了团头鲂fgfr1a和fgfr1b基因,并对团头鲂成鱼的多个组织和不同发育时期的胚胎进行表达分析。另外,通过饥饿实验和外源生长激素(h GH)处理,对团头鲂幼鱼进行了生物学的表达差异分析。序列分析表明,团头鲂fgfr1a基因c DNA序列全长3572 bp,包括702 bp的5’端非翻译区,413bp的3’端非翻译区,2457bp的开放阅读框(ORF),共编码818个氨基酸;团头鲂fgfr1b基因c DNA序列全长3117 bp,包括469 bp的5’端非翻译区,398 bp的3’端非翻译区,2250 bp的开放阅读框(ORF),共编码749个氨基酸。团头鲂fgfr1a和fgfr1b基因c DNA序列有82%的高相似性。胚胎发育不同时期,fgfr1a和-1b m RNAs在受精卵时高度表达,然后表达逐渐降低,从16hpf表达趋于稳定,但是fgfr1b m RNA在12hpf有强烈表达。整胚原位杂交(WISH)显示:在16hpf时期,fgfr1a在眼、MHB、脑、前体节中胚层和尾芽处表达,而fgfr1b仅在眼和前体节中胚层检测到表达信号;在28hpf时期,fgfr1a和-1b m RNAs在眼、脑、鳃弓和尾芽处表达;在55hpf时期,fgfr1a和-1b m RNAs又同时在眼、脑、鳃弓和脊索中表达。q RT-PCR表明,在成鱼组织中,fgfr1a m RNA在鳃、性腺、脑和中肠中高度表达,在皮肤和肾脏中表达相对较低;而fgfr1b m RNA在脑和肝脏中高度表达,在皮肤、鳃和肾脏中表达相对较低。幼鱼的饥饿实验显示,饥饿状态下fgfr1a和-1b m RNAs在肠和肝脏中的表达明显上调,而在心脏中的表达明显下降。幼鱼的h GH处理显示,h GH会注射随剂量的差异而不同程度地抑制这两基因的表达。另外,本文还开展了各品系金鱼Tgf2转座子插入拷贝数和自然缺失状况的研究。通过Southern blot和常规PCR技术对7种金鱼品系Tgf2拷贝数和缺失分布的研究发现金鱼Tgf2转座子在基因组中插入拷贝数为2-6个不等,且拷贝数在品系和个体间存在差异。常规PCR检测显示,金鱼Tgf2转座子在第1至第2外显子、第2至第4外显子区域存在不同程度的缺失。统计发现在整个金鱼品系中,完整型占5.56%,半缺失I型占7.78%,半缺失II型占73.33%,完全缺失型占13.33%,绝大多数存在内部片段缺失。金鱼Tgf2转座子较少的插入拷贝数与内部不同程度的缺失为我们进一步研究Tgf2转座子的转座机制提供了新思路。